肝豆灵对高铜负荷大鼠空间学习记忆能力及神经干细胞ROS水平的影响

匡春俊 董 婷 周 萍 李秀英 田丽伟 黄 鹏

1.安徽中医药大学，安徽 合肥 230038；2.安徽中医药大学第一附属医院脑病中心，安徽 合肥230031

Wilson病(Wilson’s disease,WD)，即肝豆状核变性(hepatolenticular degeneration,HLD)，是ATP7B基因缺陷引起的铜代谢障碍疾病。患者因基因缺陷不能清除体内多余的铜，使铜离子沉积于脑部、肝脏、肾脏、皮肤、眼部等脏器系统，使各组织脏器铜中毒受损而出现多样的临床表现。铜作为强氧化剂，可激活自由基，促进ROS的产生[1]，诱发氧化应激反应，使神经细胞凋亡。铜沉积脑部，神经系统受损，出现进行性智力减退[2-3]、精神异常等症状。在祖国医学研究中，将WD以认知能力下降为主要临床表现的辨病为“痴呆病”，其中“痰瘀互结型”易出现认知障碍。安徽中医药大学第一附属医院脑病中心为WD患者研制的肝豆灵(Gan dou liang,GDL)具有化痰祛瘀作用，课题组前期研究发现肝豆灵能够明显改善WD患者认知障碍[4]，提高患者智力水平。课题组在WD病程研究过程中发现，NSC是高铜负荷的重要靶点，肝豆灵能抵抗高铜导致的NSC生长阻碍，从而发挥神经保护作用[5]。因此，本研究从动物、分子水平，利用课题组前期体外建立的高铜培养NSC模型[6]，予以药物“肝豆灵”干预，观察胎鼠海马组织NSC中ROS水平的高低，为探讨肝豆灵对高铜诱导的NSC损伤小鼠的神经保护作用及其分子机制提供研究基础。

1 实验材料

1.1 动物 体重200～220 g SD大鼠75只，SPF级，由安徽动物中心提供，许可证号为SCXK(皖)2014-002。大鼠于专用清洁实验室饲养1周，温度25℃，相对湿度50%～70%，模拟自然昼夜循环光照的非直射光线。孕14 d ICR小鼠3只，适应性喂养后取胚胎海马组织，分离并培养NSC。……