卵泡液内微量元素与体外受精-胚胎移植结局关系的研究

毕慧玲 苗聪秀 苗卉 李娜 李敏

[摘要] 目的 探究IVF-ET不同妊娠結局者卵泡液内微量元素水平变化，以及其与妊娠结局者的关系。方法 2017年2—4月方便选取该院进行IVF-ET治疗的97例女性不育患者进行研究，根据妊娠结局分为妊娠组（59例）、非妊娠组（38例），采用GnRH-a-Gn-hCG方案控制排卵，卵泡穿刺后收集上清卵泡液，电感耦合等离子体质谱法检测卵泡液铜、锌、铁、硒、铅水平。结果 妊娠组卵泡液中微量元素锌、硒[（0.52±0.13）ppm、（54.93±3.44）ppb]水平均高于非妊娠组[（0.30±0.18）ppm、（40.51±4.21）ppb]，差异有统计学意义（t=6.514、17.649，P<0.05）。妊娠组与非妊娠组卵泡液中微量元素铜、铁水平差异无统计学意义（P>0.05）。高龄组较非高龄组妊娠率低（42.86%、68.12%），差异有统计学意义（χ2=5.333，P<0.05），高龄组与非高龄组比较微量素锌、铜、铁、硒及铅均差异无统计学意义（P>0.05）。结论 卵泡液中微量元素锌、硒与IVF-ET妊娠结局有相关性，微量元素铜、铁、铅与IVF-ET妊娠结局无相关行。卵泡液中微量元素铜、铁、锌、硒、铅与IVF患者年龄无相关性。

[关键词] 体外受精-胚胎移植;卵泡液;微量元素;临床妊娠

[中图分类号] R714          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-0742（2020）01（b）-0007-04

Study on the Relationship between Trace Elements in Follicular Fluid and in Vitro Fertilization-embryo Transfer Outcome

BI Hui-ling， MIAO Cong-xiu， MIAO Hui， LI Na， LI Min

Department of Reproductive Genetics， Affiliated Peace Hospital， Changzhi Medical College， Institute of Reproductive Genetics， Changzhi Medical College， Changzhi， Shanxi Province， 046000 China

[Abstract] Objective To investigate the changes of trace element levels in follicular fluid of IVF-ET patients with different pregnancy outcomes and their relationship with pregnancy outcomes. Methods A total of 97 female infertility patients from Feb 2017 to Apr 2017 who underwent IVF-ET treatment in this year were enrolled. According to the pregnancy outcome， they were divided into pregnancy group （59 cases） and non-pregnant group （38 cases）. GnRH-a-Gn-hCG program was used to control ovulation. After follicular puncture， the supernatant follicular fluid was collected， and the levels of copper， zinc， iron， selenium and lead in follicular fluid were detected by inductively coupled plasma mass spectrometry. Results The levels of trace elements zinc and selenium [（0.52±0.13）ppm、（54.93±3.44）ppb]in the follicular fluid of the pregnant group were higher than those in the non-pregnant group[（0.30±0.18）ppm、（40.51±4.21）ppb]. The difference was statistically significant （t=6.514， 17.649， P<0.05）. There was no significant difference in the levels of trace elements copper and iron in the follicular fluid between the pregnant and non-pregnant groups （P>0.05）. The pregnancy rate was lower in the elderly group than in the non-age group （42.86%， 68.12%）， the difference was statistically significant （χ2=5.333， P<0.05）. The older group and the non-age group were compared with trace zinc， copper， iron， selenium and lead. There was no statistically significant difference（P>0.05）. Conclusion There is a correlation between trace element zinc and selenium in follicular fluid and IVF-ET pregnancy outcome. There is no correlation between trace elements copper， iron， lead and IVF-ET pregnancy outcome. There were no correlations between the trace elements of copper， iron， zinc， selenium and lead in follicular fluid and IVF patients.

[Key words] In vitro fertilization-embryo transfer; Follicular fluid; Trace elements; Clinical pregnancy

体外受精-胚胎移植（ in vitro fertilization andembryotransfer，IVF-ET）是临床治疗不孕症的主要技术，由于治疗过程妊娠成功率受较多因素的影响，虽IVF-ET妊娠率已有较大提高，但仍有一部分患者不能成功，因此进一步寻找影响IVF-ET的因素，对于提高IVF-ET成功率，改善妊娠结局具有一定的积极意义[1]。微量元素是机体生长、发育、以及维持正常生理功能不可缺少的元素，研究显示微量元素可促进内分泌腺分泌雌性激素进而发挥其相应生理作用[2]。微量元素的缺乏则会影响内分泌器官结构异常，进而影响机体内分泌水平，降低受孕率[3]。与生殖过程密切相关的微量元素是否也会影响IVF-ET临床妊娠结局，目前尚不清楚。该研究以2017年2—4月在该院进行IVF-ET的97例患者为例，通过分析卵泡液中的微量元素锌、铜、铁、硒及铅，探究微量元素对IVF-ET临床妊娠结的影响，现报道如下。

1  资料与方法

1.1  一般资料

方便选取在该院进行IVF-ET治疗的97例女性不育患者进行研究，根据妊娠结局分为妊娠组（59例）、非妊娠组（38例）。妊娠组：患者年龄24～39岁，平均（30.39±3.17）岁;不孕年限1～10年，平均（3.15±0.79）年。非妊娠组：患者年龄24～37岁，平均（31.53±2.65）岁;不孕年限1～9年，平均（3.37±0.63）年。两组上述资料对比差异无统计学意义（P>0.05）。

病例选取标准：①性生活正常未采取避孕措施;②经期正常;③半年内未服用激素药物治疗;④患者对该次研究知情，并同意参与研究，签署同意书。排除标准：①先天性生殖器官发育异常;②男方因素导致不孕;③遗传性疾病、生殖系统感染;④合并肿瘤、心脑血管严重疾病;⑤接触重金属职业史及吸烟史。

1.2  试剂与仪器

电感耦合等离子体质谱法仪器为Agilent 7900x ICP-MS;促性腺激素释放激素激动剂（GnRH-a）（批号：H20120298），规格3.75 mg;促性腺激素（Gn）（批号 S20110005），规格33 μg;重组人绒毛膜促性腺激素250 μg（批号：BA045761）。

1.3  GnRH-a-Gn-hCG方案控制排卵

所有不孕患者均采用GnRH-a-Gn-hCG方案（短效長方案）控制排卵，于月经周期黄体中期垂体降调节，14～17 d后启动促排，采用阴道B超检测卵泡大小，结合性激素结果对Gn用量进行调节，当两个以上卵泡直径超过18 mm时（或3个卵泡平均直径超过16 mm）注射重组人绒毛膜促性腺激素250 μg，36～37 h内经阴道B超引导进行取卵，行常规胚胎体外受精培养，同时观察记录获卵数、受精率、优胚率等。取卵后3 d行胚胎移植手术，移植4周后经B超检测宫内出现妊娠囊、胎心搏动等判断为临床妊娠。

1.4  卵泡液中微量元素铜、锌、铁水平检测

选择每例患者首个直径≥16 mm卵泡进行穿刺，体视显微镜下捡卵后将卵泡液吸入聚乙烯试管中密闭，离心，取上清，-20℃保存待测。常温解冻卵泡液，采用电感耦合等离子体质谱法测定卵泡液内锌（Zn）、铜（Cu）、硒（Se）及铅（Pb）的含量。

1.5  统计方法

采用SPSS20.0统计学软件进行数据分析，计量资料用（x±s）表示，进行t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  不同妊娠结局患者临床参数比较

两组患者在年龄、不孕年限、Gn用量、获卵数量、移植胚胎数量、卵裂率、受精率、血清基础FSH、LH、E2水平及基础AFC方面比较，差异无统计学意义（P>0.05）。妊娠组优胚率高于非妊娠组，两组间差异有统计学意义（t=7.249，P=0.006<0.05）。见表1。

2.2  不同妊娠结局患者卵泡液中微量元素铜、锌、铁水平比较

妊娠组卵泡液中微量元素铜、锌、硒水平均高于非妊娠组，差异有统计学意义（t=6.514、17.649，P=0.012、0.009<0.05）妊娠组与非妊娠组卵泡液中微量元素铜、铁水平差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

2.3  高龄组（>35岁）与非高龄组（≦35岁）间微量元素的比较

高龄组较非高龄组妊娠率低（42.86% vs 68.12%），差异有统计学意义（χ2=5.333，P<0.05），高龄组与非高龄组比较微量素锌、铜、铁、硒及铅均差异无统计学意义（P>0.05）。见表3。

3  讨论

微量元素为金属离子，属于人体必不可少的营养元素，为机体维生素、激素、酶重要组成成分，微量元素缺乏则会导致生理功能紊乱[4]。近期研究显示，微量元素参与酶、载体的构成及电子传递系统、维生素、激素合成，在维持身体营养、生理功能方面发挥重要作用[5]。临床研究表明微量元素可影响内分泌腺体、组织及激素分泌，微量元素异常则影响下丘脑-垂体性腺激素水平，且必需微量元素过量或贫乏，均引发内分泌腺功能异常，影响生殖[6-7]。因此微量元素代谢紊乱、水平的异常可能是导致不明原因不孕的重要因素。

锌为人体不可缺少的微量元素，身体内和锌有关的醇高达200种，主要分布在卵母细胞或卵细胞胞浆内，在卵母细胞的发育发挥重要作用。动物研究显示，卵母细胞中缺乏锌元素，则会影响细胞的成熟，使异常形态卵母细胞数量升高[8]。此外还有研究显示缺锌可使下丘脑LHRH水平降低，进而导致垂体分泌 FSH/LH水平降低，影响卵泡的成熟、生长[9]。动物研究显示，恒河猴体内缺锌后，B超监测显示卵巢异常发育[10]。尹耀学等[11]研究显示用不同剂量的锌刺激优势卵泡内颗粒细胞，结果显示随着锌处理剂量的升高，细胞中FSH水平则降低，影响卵泡的发育。该研究显示妊娠组卵泡液中锌元素的水平明显升高，达到（0.52±0.13）ppm，显著高于未妊娠组的（0.30±0.18）ppm。该次研究中关于锌的相关研究结果与孙艳等人[12]研究一致，妊娠组锌（1.25±0.41）ppm高于未妊娠组（1.16±0.21）ppm。提示锌元素水平可能影响胚胎质量、妊娠情况。

[11]  尹耀学， 苏友强. LH/EGF诱导ICR小鼠窦状卵泡卵母细胞体外成熟与排卵的研究[J]. 南京医科大学学报：自然科学版， 2017，37（9）：1163-1167.

[12]  孙艳，林丽钦，康跃凡，等.微量元素锌、铜与体外受精-胚胎移植临床结局的关系[J].中国综合临床， 2011， 27（10）：1009-1012.

[13]  Bergstra T J， Hogeveen H， Stassen E N. Attitudes of different stakeholders toward pig husbandry： a study to determine conflicting and matching attitudes toward animals， humans and the environment[J]. Agriculture & Human Values， 2017， 34（2）：1-13.

[14]  Pérez J， Martínez A， Descals E， et al. Responses of Aquatic Hyphomycetes to Temperature and Nutrient Availability： a Cross-transplantation Experiment[J].Microbial Ecology， 2018， 76（2）：1-12.

[15]  李欣，李清虹，李清峰，等. 食品中铜对早孕妇女健康探讨与分析[J]. 山西医药杂志， 2014，43（16）： 1942-1943.

[16]  龍玲芳， 张雪辉， 陈树平. 健康体检妊娠妇女全血微量元素检测结果分析[J]. 海南医学， 2017， 28（7）：1107-1110.

[17]  张喜梅， 马国芳. 克罗米芬联合二甲双胍对多囊卵巢综合征患者外周血T细胞亚群及氧化应激水平的影响[J]. 山东医药， 2017， 57（12）：88-90.

[18]  刘忠慧. 氧化应激对多囊卵巢综合征患者体外受精-胚胎移植结局的影响[D]. 青岛：青岛大学， 2015.

[19]  毕慧玲， 刘锦宏. 微量元素锌、硒、铅及生殖激素与生殖健康的关系[J]. 中国卫生标准管理， 2017， 8（18）：29-31.

[20]  Vahidinia A， Samiee F， Faradmal J， et al. Mercury， Lead， Cadmium， and Barium Levels in Human Breast Milk and Factors Affecting Their Concentrations in Hamadan， Iran[J]. Biological Trace Element Research， 2018， 187（1）：1-9.

（收稿日期：2019-10-23）

[课题来源] 卵泡液内微量元素与体外受精-胚胎移植结局相关性研究（QDZ201626）。

[作者简介] 毕慧玲（1973-），女，山西晋城高平人，硕士，副主任医师，研究方向：妇产科学，不孕不育及辅助生殖技术。