促红素新型环性衍生肽对顺铂诱导肾小管上皮细胞损伤的保护作用*

王 锋，王熙坚，戴厚永，范亚平，杨 斌

（南通大学附属医院肾内科，江苏226001）

随着抗肿瘤药物、抗生素、造影剂等的广泛应用，药物引起的急性肾损伤（AKI）呈逐年上升趋势。顺铂是很多实体肿瘤化疗方案的基本药物，抗肿瘤效率高，但顺铂及其代谢物可通过有机阳离子转运蛋白被肾小管上皮细胞吸收，诱导肾小管上皮细胞的凋亡和坏死，从而导致AKI，有效缓解顺铂的肾毒性可以提高肿瘤患者的化疗质量[1]。促红素新型线性衍生肽（helix B surface peptide，HBSP）对顺铂所致AKI 的保护作用在动物模型中已得到验证[2]，本研究通过探讨促红素新型环性衍生肽（cyclic helix B peptide，CHBP）对顺铂诱导的 NRK-52E 损伤的影响及其可能的作用机制，为临床缓解顺铂肾毒性提供新的治疗思路。

1 材料和方法

1.1 主要试剂 NRK-52E 细胞（由南京医科大学附属第二医院肾内科赠送）；CHBP（上海科肽生物科技有限公司）；顺铂注射液（6 mL：30 mg）（中国江苏豪森药业集团有限公司）；DMEM-F12 培养基（美国HYCLONE 公司）；小牛血清（德国CapricornScientific公司）；PBS、青链霉素溶液（中国碧云天生物有限公司）；0.25%胰酶-EDTA（美国THERMO 公司）；Annexin V-FITC 细胞凋亡检测试剂盒（中国凯基生物有限公司）；流式细胞仪（BriCyte E6）（中国mindray公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 实验分组：体外培养NRK-52E 细胞分为三大组，（1）对照组：NRK-52E 细胞（4×105）单纯培养；（2）顺铂组：10 μmol/L 顺铂处理 NRK-52E 细胞；（3）CHBP 干预组：①低浓度亚组：16 nmol/L CHBP+10 μmol/L 顺铂处理NRK-52E 细胞；②中浓度亚组：32 nmol/L CHBP+10 μmol/L 顺铂处理 NRK-52E细胞；③高浓度亚组：64 nmol/L CHBP+10 μmol/L 顺铂处理NRK-52E 细胞。每组分别干预12 h、24 h。

1.2.2 细胞培养：NRK-52E 细胞常规复苏，用含10%小牛血清、1%青链霉素溶液的DMEM-F12 完全培养液于37 ℃、5% CO2温箱中培养，0.25%胰酶（含EDTA）消化并传代。NRK-52E 细胞以 5×105个/孔接种于6 孔板，每孔加完培至2.5 mL，培养24 h，此时NRK-52E 贴壁60%～70%，细胞形态良好。……