染料木素对乳腺癌细胞睾丸特异性蛋白酶50表达的影响①

冯 磊 李 响 孟繁平 李 妍

(延边大学医学院免疫学与病原微生物学教研室，延吉 133002)

乳腺癌作为女性发病率最高的肿瘤，严重危害女性健康[1]。亚洲人广泛摄取雌激素结构类似物，即植物性雌激素的豆科植物及中药材，染料木素(genistein，Gen)等植物性雌激素的日常饮食摄入是否可促进乳腺癌细胞生长尚存争议[2-4]。睾丸特异性蛋白酶50(testes-specific protease 50，TSP50)是近年发现的促癌基因，与乳腺癌复发密切相关[5]。约70%乳腺癌为雌激素受体阳性型(ER+)，内源或外源雌激素对癌细胞有生长促进作用[6]。本研究通过探讨不同浓度Gen对人乳腺癌细胞中TSP50表达的影响，阐明植物性雌激素对乳腺癌细胞增殖的影响，为揭示TSP50在雌激素非基因组中的效应提供研究依据。

1 材料与方法

1.1材料 人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231购自中南大学湘雅医学院；1640培养液、马血清购自美国Gibco公司；DMEM/F12培养基购自美国Hyclone公司；胎牛血清购自美国Corning公司；TSP50兔抗人免疫组化抗体购自美国Novus公司；通用型二抗购自北京中杉金桥公司；垂直板电泳槽购自美国伯乐公司；流式细胞仪购自美国贝克曼公司；酶标仪购自北京普天公司。

1.2方法

1.2.1细胞培养 复苏MCF-7细胞接种于10% 1640培养液的培养瓶中，置于37℃、5%CO2增殖培养，培养瓶中细胞生长超过80%时，胰酶消化传代至达到实验所需细胞量。

1.2.2MTT还原实验 取对数期MCF-7细胞铺于96孔板给药，24 h后取上清，加入新的含血清培养基200 ml/孔，按1∶10加入MTT试剂，37℃培养。4 h后终止培养，每孔加入200 μl DMSO溶解甲臢结晶，37℃温育10 min，将结晶溶解后的液体分装于96孔酶标板内，每份设置3个复孔，200 μl/孔，酶标仪490 nm 处检测各孔吸光度值，取3次试验平均值。……