快速制备鼻腔给予LPS诱导帕金森病动物模型及评价①

宋国斌 席国萍 李艳花 尉杰忠 刘春云 李凯军 柴 智 马媛媛 肖保国 张光先 马存根

(山西大同大学脑科学研究所,神经炎症变性疾病基础与应用研究山西省重点实验室，大同 037009)

帕金森病(Parkinson′s disease，PD)又名震颤麻痹，是仅次于阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease，AD)的第二大神经系统变性疾病，主要病理特征为黑质多巴胺能神经元变性、缺失，黑质多巴胺能神经元胞质内以α-突触核蛋白为主要成分的嗜酸性路易小体(lewy body，LB)的形成及黑质-纹状体通路以多巴胺(dopamine，DA)为代表的单胺类神经递质的减少[1-4]。研究表明，炎症在PD的发病中起重要作用，脑内小胶质细胞(microglia，MG)介导的炎症反应与PD存在重要联系[5-8]。脂多糖(lipopolysa-ccharide，LPS)是革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分，可通过激活MG来刺激机体产生炎症反应[9,10]。研究显示，LPS可通过黑质内注射、苍白球注射、纹状体注射和腹腔注射等途经引起黑质多巴胺能神经元缺失，制备PD动物模型[11,12]。LPS经鼻腔途径给予可诱导PD动物模型，但需时5个月[13]。本研究通过LPS经鼻腔小剂量、多次给药的方式，以期加快PD动物模型的制备，缩短PD发病机制及治疗效果的研究周期。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物 SPF级健康雄性C57BL/6小鼠18只，6～7月龄，体质量30～33 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司(动物实验遵照山西大同大学生物医学研究伦理审查委员会规定执行)。

1.1.2药物及试剂 LPS(Sigma公司)；兔抗酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase，TH)抗体(EMD Millipore公司)；兔抗α-突触核蛋白抗体、二抗Anti-rabbit IgG Alexa Flour 488(Cell Signaling Technology公司)；二抗HPR-goat anti-rabbit IgG(EARTH公司)；显影液ECL(Life Sciences公司)；辛基磺酸钠(octanesulfonic acid sodium salt，OSA)、去甲肾上腺素(norepinephrine，NE)、肾上腺素(epinephrine，E)标准品、DA标准品、3,4-二羟……