喙尾琵琶甲营养成分分析与评价

代欣桃 ，李文锐 ，闻焜 ，杨志斌 , *

1. 云南省昆虫生物医药研发重点实验室（大理 671000）；2. 大理州食品药品检验所（大理 671000）；3. 中国西南药用昆虫及蛛形类资源开发利用协同创新中心（大理 671000）；4. 药用特种昆虫开发国家地方联合工程研究中心（大理 671000）

喙尾琵琶甲（Blaps rynchopetera Fairmaire）属鞘翅目（Coleoptera）拟步甲科（Tenebrionidae）琵琶甲属（Blaps Fab），别名臭壳子、小黑虫、臭屁虫、臭虫等，是云南民间长期使用的一种药用昆虫，可食用，主要用于牙周疾病、发烧、积食、皮肤瘙痒、风湿等，也常被用于治疗肿瘤、咳嗽、胃炎等疑难杂症[1]。对该昆虫的研究报道主要集中在自然分布、化学成分和药理作用等方面[2-5]，鲜有对其营养成分及价值的报道。试验对喙尾琵琶甲的营养成分进行分析和评价，为这一传统药用昆虫的进一步开发和应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 药材

虫种由大理大学昆虫生物医药研究院提供，经杨自忠教授鉴定为喙尾琵琶甲（Blaps rynchopetera Fairmaire），样品现存于大理大学昆虫生物医药研究院。

1.2 试剂

17种氨基酸混合标准溶液：苏氨酸（Thr）、天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、丝氨酸（Ser）、缬氨酸（Val）、甘氨酸（Gly）、胱氨酸（Cys）、丙氨酸（Ala）、异亮氨酸（Ile）、蛋氨酸（Met）、酪氨酸（Tyr）、亮氨酸（Leu）、组氨酸（His）、苯丙氨酸（Phe）、精氨酸（Arg）、赖氨酸（Lys）、脯氨酸（Pro）（批号09070113，德国塞卡姆公司）；牛血清白蛋白（批号140619-201723，中国食品药品检定研究院）；葡萄糖（批号891921，上海化学试剂公司）；石油醚（30～60 ℃）、苯酚、硫酸、福林酚试液、茚三酮等（国产分析纯）；超纯水。

1.3 仪器与设备

全自动氨基酸分析仪（S-433D，德国赛卡姆公司）；紫外-可见分光光度计（UV-2550，日本岛津公司）；电子天平（MS 205 DU，上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；全触控恒温干燥箱（SWOF-W155，大韩科学有限公司中国分公司）；酸度计（STARTER 3100，奥豪斯上海仪器有限公司）。

1.4 方法

1.4.1 水分

参照2015版中国药典四部通则0832项下烘干法[6]测定。

1.4.2 总灰分

参照2015版中国药典四部通则2302项下方法[6]测定。

1.4.3 粗脂肪

参照索氏提取法[7]进行提取和测定。

1.4.4 粗多糖测定[8]

1.4.4.1 供试品溶液制备

准确称取2.0 g样品粉末，加入20 mL石油醚，重复超声提取离心3次，弃去上清液，干燥后加入10 mL水，回流提取1 h，离心，弃去上清液，重复提取2次，滤液合并后于50 ℃下减压浓缩至5 mL，加入20 mL乙醇沉淀，4 ℃过夜，沉淀用无水乙醇脱水，低温干燥。1.4.4.2 对照品溶液制备

准确称取10.0 mg干燥至恒质量的葡萄糖对照品于一只10 mL容量瓶中，加适量水使溶解并稀释至刻度。摇匀，精密量取2.5 mL置于另一只50 mL容量量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

1.4.4.3 标准曲线绘制

精密吸取适量对照品溶液，用水依次稀释，配制成质量浓度分别为0.010，0.015，0.020，0.030，0.040和0.050 mg/mL的系列标准溶液，加入1.0 mL 5%苯酚溶液和5.0 mL硫酸，水浴加热20 min，放至室温，于490 nm波长处测定吸光度。横坐标X为对照品溶液浓度，纵坐标Y为其对应的吸光度，绘制标准曲线，得回归方程Y=13.431X+0.005 8，r=0.999 6。结果表明，葡萄糖含量在0.01～0.05 mg/mL范围内线性关系良好。

1.4.4.4 多糖含量测定

精密称取15.0 mg所得粗多糖于50 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。精密吸取2.0 mL，按1.4.4.4的方法测定，并按式（1）计算粗多糖含量。

式中：C为样品中粗多糖浓度，mg/mL；V为样品体积，mL；D为样品中粗多糖占总粗多糖比例；m为样品粉末质量。g；ms为水分，g。

1.4.5 蛋白含量测定[8]

1.4.5.1 供试品溶液制备

准确称取1.0 g药材粉末，加入15 mL 0.5%氢氧化钠溶液，50 ℃浸提1 h，取上清液，用1 mol/L HCl调节pH至4.5，可见明显的沉淀析出，离心，取沉淀，低温干燥后用20%醋酸溶解，再用葡聚糖凝胶G-25色谱法去盐，冻干后用适量水溶解（调节pH 8～9）并定容至50 mL量瓶中，摇匀，备用[7]。

1.4.5.2 标准曲线绘制

参照2015版中国药典四部通则0731项下福林酚法的方法1[6]测定。横坐标X为对照品溶液浓度，纵坐标Y为其对应的吸光度，绘制标准曲线，得回归方程Y=2.933 8X-0.003 6，r=0.999 6。结果表明，牛血清白蛋白含量在0.02～0.20 mg/mL范围内线性关系良好。

1.4.5.3 含量测定

按1.4.5.2的方法测定，并按式（2）计算蛋白含量。

式中：C为样品中蛋白浓度，mg/mL；V为样品体积，mL；D为样品中粗盐蛋白占总粗盐蛋白比例；m为样品粉末质量，g；ms为水分，g。

1.4.6 氨基酸含量测定

精密称取1.0 g药材粉末，置水解管中，加入20 mL 6 mol/L的盐酸，充氮气密封，置110 ℃干燥箱中水解24 h。取出后放至室温，打开封口，将水解液过滤至蒸发皿中，用水少量多次冲洗水解管，洗涤液并入蒸发皿中，蒸干，残渣加适量超纯水溶解并稀释至25 mL，摇匀，精密量取1 mL，用0.12 mol/L柠檬酸钠（pH 2.20）定容至10 mL，作为供试品溶液，使用全自动氨基酸分析仪测定样品中氨基酸含量。

1.4.7 氨基酸营养价值评价

根据氨基酸比值系数法[9]，将样品中氨基酸组成与1973年世界卫生组织（WHO）和联合国粮农组织（FAO）提出的必需氨基酸评分模式[10]为标准，全面评价其营养价值。计算氨基酸比值（RAA）、氨基酸比值系数（RC）和氨基酸比值系数分（SRC）。计算公式如式（3）～（5）所示。

式中：CV为RC的变异系数，CV=标准差/均数。

2 结果

2.1 常规营养成分分析

由表1可知，喙尾琵琶甲中水分和总灰分的含量分别为6.04%和3.58%，符合云南省食品药品监督管理局云食药监注[2011]21号文件关于颁布琵琶甲等3个药材及饮片标准的通知规定，水分不得过10.0%，总灰分不得过4.0%；脂肪含量10.51%，远低于猪肉（69.54%）和羊肉（42.59%）等动物性食品，蛋白含量10.12%，与牛肉（15.40%）接近[11]。说明喙尾琵琶甲具有高蛋白和低脂肪的特点。

表1 喙尾琵琶甲中水分、粗多糖、粗脂肪、总灰分、蛋白质测定结果（n=3，x±s）

2.2 氨基酸组成分析

由表2～表4可知，喙尾琵琶甲所含氨基酸种类齐全，含有16种氨基酸，包含人体必需的7种氨基酸。除蛋氨酸+胱氨酸低于FAO/WHO模式谱，为第一限制氨基酸，其余各种必需氨基酸含量均与模式谱标准接近。另外，喙尾琵琶甲的氨基酸组成E/T为0.33，E/N为0.49，这与FAO/WHO提出的E/T应为0.4左右，E/N应为0.6左右的参考蛋白质模式接近[12]。

表2 喙尾琵琶甲中氨基酸组成与质量分数

表3 喙尾琵琶甲中必需氨基酸占总氨基酸的质量分数

表4 喙尾琵琶甲的RAA、RC及SRC分析结果

3 结论

喙尾琵琶甲被广泛应用于民间，在云南民间用其治疗肝癌、胃癌、直肠癌、膀胱癌、子宫颈癌、乳腺癌和食道癌等[13]。80%以上的彝族验方中均有关于喙尾琵琶甲的记载，用于治疗肿瘤、心血管及类风湿等[14]。试验结果表明，喙尾琵琶甲中粗多糖、蛋白质和粗脂肪含量丰富，尤其是人体必需氨基酸含量较高，具有一定营养价值，是一种极具开发利用潜力的药食两用昆虫资源，具有广阔发展前景。