肝纤维化小鼠模型中弹性蛋白及其调控因子在肝纤维化形成和逆转中的分子机制

杨爱婷，严旭禛，赵文姗，李为雨，陈 巍，尤 红

首都医科大学附属北京友谊医院 科研实验中心，北京市临床医学研究所，国家消化系统疾病临床医学研究中心，北京 100050

肝纤维化是以细胞外基质(ECM)过度沉积为特征的慢性肝脏疾病[1]。除胶原外，弹性蛋白已被证实在肝纤维化尤其在肝硬化阶段大量沉积[1-2]。成熟的弹性蛋白是一种不溶性非极性蛋白，由可溶性单体原弹力蛋白聚合而成[3]。原弹性蛋白分子富含丙氨酸和赖氨酸残基，它们是交联反应的主要位点。此外，在成熟的ECM中，分子间交联增加了弹性纤维的不溶性，使ECM不易被降解，进而限制了纤维化的可逆性。因此弹性蛋白在肝组织沉积可能是部分患者肝硬化无法逆转的原因[4]，但弹性蛋白在纤维化进展过程中的动态变化尚不清楚。本文旨在动态观察弹性蛋白在四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化模型小鼠进展过程中的表达特点，进一步探寻影响弹性蛋白沉积的可能机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选用8周龄雄性C57B6/J小鼠[斯贝福，北京；生产许可证编号：SCXK(京)2014-0006；实验动物使用许可证编号：SCXK(京)2017-0019]，动物自由进食、饮水，标准饲料颗粒喂食，室温20 ℃～22 ℃，每12 h明暗循环。

1.2 试剂和仪器 反转录试剂盒(Promega公司)、ABI Power SYBR Green PCR Master Mix试剂盒(Applied Biosystems，USA)、弹性蛋白染液(贝索，珠海)、抗弹性蛋白(MAB2503；Millipore，USA)、抗Ⅰ型胶原(PA5-95137，Invitrogen，USA)，7500快速序列检测器(Applied Biosystems，USA)、Fastin ElastinTMAssay(Biocolor life science assays，UK)、SircolTMInsoluble Collagen Assay(Biocolor life science assays，UK)、LC-MS/MS-IT-TOF高效液质联用色谱仪(Shimadzu，Japan)。

1.3 实验方法

1.3.1 小鼠CCl4肝纤维化形成及自发逆转模型的建立将CCl4溶于橄榄油(CCl4和橄榄油按1∶7体积混合)，给予0.2 ml/100 g腹腔注射，2次/周，连续8周。纤维化进展期组分别于CCl4腹腔注射的第4周和8周末处死小鼠；……