鸡新城疫病毒毒种保存期试验

新城疫（ND）俗称“鸡瘟”，由新城疫病毒（NDV）的强毒株引起多种禽类急性、高度接触性、致死性传染病，人类偶尔亦可感染，给世界禽业养殖带来了毁灭性打击，造成极为严重的影响[1]。一年四季均可以发生此病。主要的传播方式是接触传播，主要的传染源是患病鸡、带毒鸡的分泌物。

本实验取鸡新城疫检验和基础种子批冻干毒存放于-70℃保存，并于不同的保存时间随机抽样，进行病毒含量测定、无菌检验及对鸡毒力测定，确定冻干毒种-70℃条件下的保存期；将检验和生产种子批湿毒存放于-20℃保存，并于保存后不同时间随机取出，进行病毒含量测定、无菌检验及对鸡毒力测定，确定湿毒-20℃条件下的保存期，现将试验结果报告如下。

1 材料

1.1 毒种（表1）

表1 毒种

1.2 检验用培养基无菌检验用硫乙醇酸盐培养基（T.G）、酪胨琼脂（G.A）和葡萄糖蛋白胨（G.P），自己制备；支原体检验用Frey氏培养基，购自中国兽医药品监察所。

1.3 SPF鸡及SPF鸡胚由哈药集团生物疫苗有限公司五常SPF鸡场提供。

2 方法

2.1 准备将检验和基础种子批冻干毒存放于-70℃保存，并于保存当日和保存后12、24、36、48、60、72、75和78个月随机抽样，分别进行病毒含量测定、无菌检验及对鸡毒力的测定；检验和生产种子批湿毒存放于-20℃保存，并于保存当日和保存后3、6、9、12、15和18个月，随机抽样分别进行病毒含量测定、对鸡毒力测定和无菌检验。

2.2 病毒含量将毒种用生理盐水作10倍系列稀释，取10-7、10-8、10-93个稀释度，各尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚5枚，每胚0.1mL，置36～37℃继续孵育，24h以前死亡的鸡胚弃去不计，记录24～72h鸡胚死亡情况，按Reed-Muench法计算ELD50。

2.3 对鸡毒力用60和90日龄SPF鸡10只，各肌肉注射病毒液0.1mL（含105.0ELD50），观察14d，记录鸡死亡结果。

2.5 无菌检验按照现行《中国兽药典》附录进行检验。

3 结果

3.1 冻干毒种保存期试验结果

3.1.1 不同保存时间冻干毒种病毒含量及血凝价测定结果（表2）

表2 病毒含量及血凝价测定结果

3.1.2 不同保存时间检验用冻干毒种对鸡毒力试验结果（表3）

表3 对鸡毒力量测定结果

3.1.3 不同保存时间冻干毒种无菌检验试验结果（表4）

表4 无菌检验结果

(续表)

从表2～4结果可以看出，检验种子和基础种子批冻干毒种于-70℃保存75个月，病毒含量和血凝价与保存当日无明显差异，无细菌和霉菌污染；检验用冻干强毒种于-70℃保存75个月与保存当日均可致60和90日龄鸡9/10～10/10死亡；无细菌和霉菌污染。

3.2 湿毒保存期试验结果

3.2.1 不同保存时间检验和生产毒种湿毒病毒含量测定结果（表5）

从表5结果可以看出，检验和生产种子批湿毒于-20℃保存15个月，病毒含量和血凝价与保存当日无明显差异，保存18个月病毒含量下降1个滴度以上，血凝价均为1：256。

表5 病毒含量及血凝价测定结果

3.2.2 不同保存时间检验用湿毒种对鸡毒力试验结果（表6）

表6 对鸡毒力量测定结果

从表6结果可以看出，检验种子批湿毒于-20℃保存15个月与保存当日均可致60和90日龄鸡9/10～10/10死亡，保存18个月仅可致6/10～7/10死亡。

3.2.3 不同保存时间毒种湿毒无菌检验测定结果（表7）

表7 湿毒无菌检验结果

(续表)

从表7结果可以看出，检验和生产种子批湿毒于-20℃保存18个月与保存当日均无细菌、霉菌污染。

4 结论

4.1 鸡新城疫病毒检验用冻干毒种于-70℃保存75个月，病毒含量、血凝价与保存当日无明显变化，且无细菌和霉菌污染；检验用冻干强毒种对鸡的毒力与保存当日无明显差异，无细菌和霉菌污染；湿毒于-70℃保存15个月，病毒含量、血凝价与保存当日无明显变化，且无细菌和霉菌污染；检验用冻干强毒种对鸡的毒力与保存当日无明显差异，无细菌和霉菌污染。保存78个月病毒含量下降1个滴度以上，检验强毒对鸡的毒力下降。

4.2 鸡新城疫病毒检验与生产种子批湿毒于-20℃保存15个月，病毒含量、血凝价、对鸡的毒力与保存当日无明显差异，无细菌、霉菌污染；保存18个月病毒含量下降1个滴度以上，检验强毒对鸡的毒力下降。