清热化毒丸含量测定的研究

于远洋，周 凌，康 凯，姜范成，胡景莲

（大连市检验检测认证技术服务中心，辽宁 大连 116021）

清热化毒丸是由连翘,青黛等16味药材组成的复方制剂。收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第二册，具有消火化毒、消肿止痛之功效，临床上可用于治疗小儿身热烦躁，咽喉肿痛等，原质量标准仅为显微鉴别及盐酸小檗碱、靛蓝及靛玉红的TLC定性鉴别，不够全面。基于2015版《中国药典》要求[1]，本实验通过HPLC法测定连翘酯苷A、黄芩苷含量，为全面控制该制剂质量提供依据。

1 材 料

Waters 2695型高效液相色谱仪；Sartorius LE244S、BP211D②型(赛多利斯)电子天平；双频数控超声波清洗器。药材购自亳州市中正中药材饮片有限公司，经大连市药品检验所胡景莲主任中药师鉴定，为2015版《中国药典》规定品种。黄芩苷、连翘酯苷A对照品购自中检院。甲醇、乙腈为色谱纯；其他试剂为分析纯；水为超纯水。清热化毒丸（某（辽宁）制药有限责任公司；某股份有限公司制药厂；本溪某制药有限责任公司；吉林某制药股份有限责任公司，丸重3 g）。

2 含量测定

2.1 连翘酯苷A HPLC定量测定[2]

2.1.1 色谱条件：Waters Symmetry C18色谱柱（4.6 mm x250 mm,5 μm）；乙腈-0.4%冰醋酸溶液(14：86)为流动相；检测波长为330 nm。进样量10 µl

2.1.2 对照品溶液制备：取连翘酯苷A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含50 µg的溶液。供试品溶液制备，取本品0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25 ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液。

2.1.3 方法学考察：按上述条件测定，以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程分别为：Y=14939.7233X-38736.1299 r=0.9998，结果表明，连翘酯苷A在0.0477～1.909 μg范围内线性关系良好。精密度符合要求，峰面积RSD（n=6）为1.2%；方法重复性良好，含有量RSD（n=6）为0.13%；供试品溶液24小时内稳定性良好，峰面积RSD（n=6）为0.7%；平均加样回收率为100.3%，RSD（n=6）为2.5%；分别用另外三种不同品牌色谱柱Agilent Extend-C18、Agilent Eclipse Plus-C18、Thermo BDS Hypersil-C18测定，分离效果良好，耐用性符合要求；方法专属性强，图1显示阴性无干扰。

图1 连翘酯苷A HPLC色谱图

2.2 黄芩苷HPLC定量测定

2.2.1 色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-磷酸(47：53：0.2)为流动相；检测波长：280 nm。色谱柱：Agilent Eclipse Plus-C18（4.6×250 mm 5μm）。进样量10 µl。

2.2.2 对照品溶液制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含50 µg的溶液。供试品溶液制备 取本品0.5 g，精密称定，精密加入70%乙醇50 ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用70%乙醇补充减失的重量，滤过，取续滤液。

2.2.3 方法学考察：按上述条件测定，以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，Y=37208.1137X+25386.7184 r=0.9999，结果表明，黄芩苷在0.0472～1.888 μg范围内线性关系良好。精密度符合要求，峰面积RSD（n=6）为0.8%；方法重复性良好，含有量RSD（n=6）为0.3%；供试品溶液在24小时内稳定性良好，峰面积RSD（n=6）为0.7%；平均加样回收率为96.9%，RSD（n=6）为0.5%；用另三种不同品牌色谱柱Agilent Extend-C18、Thermo GOLD aQ-C18、Waters Symmetry C18测定，分离效果良好，耐用性符合要求；方法专属性强，图2显示阴性无干扰。

图2 黄芩苷HPLC色谱图

2.3 含量测定数据

按供试品溶液制法，对9批样品进行测定，以《中国药典》为依据，按干燥品折算，本品中连翘酯苷A理论含量约为0.12 mg/g，实测含量远高于理论值。按样品实测结果平均值70%制定限度，每1 g含连翘以连翘酯苷A计，不得少于1.5 mg；黄芩苷理论含量约为1.94 mg/g，由实测结果可见，样品均达到理论值。考虑工业生产中的损失，以实测结果平均值70%制定限度，每1 g含黄芩以黄芩苷计，不得少于1.7 mg。

3 讨 论

中药质量标准的规范化是现代中药发展的瓶颈之一[3]，我国现行中成药标准中药味的鉴别数量较少，并且含有量测定指标较少。本实验通过HPLC法测定连翘酯苷A、黄芩苷含量，方法简便、可靠、准确，可建议用于清热化毒丸的质量控制。