罗格列酮预处理对缺氧诱导肾小管上皮细胞坏死性凋亡的影响及其机制

席志杨，覃远汉，潘竞，涂立，蹇淑娟

广西医科大学第一附属医院，南宁530021

肾间质纤维化(RIF)是各类肾脏病进展至终末期肾病的共同特征，其发生发展与肾小管上皮细胞(RTEC)损伤密切相关[1]。缺氧是最常见的RTEC损伤原因之一，可能导致RTEC的坏死性凋亡。坏死性凋亡作为一种具有坏死特征的细胞程序性死亡，是细胞死亡的重要形式[2,3]。抑制细胞坏死性凋亡可限制肾脏细胞的炎症级联反应，从而抑制肾脏细胞死亡，对肾脏具有一定的保护作用[4]。研究表明，过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达改变与细胞坏死性凋亡的发生密切相关[5]。2019年3月～2020年1月，本研究观察了PPARγ激动剂罗格列酮预处理对缺氧诱导RTEC坏死性凋亡的影响，并探讨其可能的机制。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 细胞：大鼠RTEC细胞株NRK-52E购于中国科学院上海生物细胞库。主要试剂：高糖DMEM培养基、超滤胎牛血清均购于美国HyClone公司，罗格列酮试剂购于美国Sigma公司；兔单克隆一抗PPARγ购于美国SAB公司，兔单克隆一抗受体交互作用蛋白1(RIP1)、RIP3购于美国CST公司。

1.2 细胞分组处理 将NRK-52E细胞置于含10%胎牛血清及1%双抗的高糖DEME培养基中，37 ℃、50 mL/L CO2培养箱中进行培养。待细胞融合80%时传代，接种到新的培养瓶中；待细胞贴壁生长融合60%～70%时，更换新的培养基。将细胞随机分为罗格列酮组、缺氧模型组及正常对照组。罗格列酮组给予15 μmol/L罗格列酮进行预处理，缺氧模型组及罗格列酮组置于含95% N2和5% CO2混合气体的缺氧小室中，正常对照组置于37 ℃、50 mL/L CO2培养箱中，各组均培养48 h。

1.3 细胞超微结构观察 将各组细胞消化离心后，弃去培养基，沿离心管管壁缓慢加入预冷的2.5%戊二醛固定液固定4 h。……