基于聚(2-甲基-2-唑啉)和聚丙烯酸的混合刷在毛细管电泳在线富集溶菌酶中的应用

张 淼, 王雨晨, MUHAMMAD Atif, 陈丽娟, 王延梅*

(1. 中国科学技术大学高分子科学与工程系, 安徽 合肥 230026;2. 皖西学院材料与化工学院, 安徽 六安 237012)

溶菌酶又称胞壁质酶,是一种广泛存在于生物体内的碱性蛋白质。溶菌酶不仅可以水解细菌细胞壁中的肽聚糖,导致细胞壁破裂,菌体溶解,而且能够与病毒蛋白直接结合使病毒失活,具有抗菌、抗病毒、消炎等功效而广泛应用于食品、医药等行业[1,2]。此外,溶菌酶常被用作模型蛋白,用于研究蛋白质的构象、酶动力学及其与分子免疫间的关系等[3]。目前,常用的溶菌酶检测方法有分光光度法[4]、酶联免疫吸附法(ELISA)[5]、高效液相色谱法(HPLC)[6]和毛细管电泳法(CE)[7]等。CE由于分析速度快、分离效率高、试剂消耗量少等优点,广泛用于蛋白质的分离分析中[8-10]。紫外检测器(UV)是CE常用的检测方式,但是由于毛细管进样体积小和检测光程短等,使CE-UV的检测灵敏度受到限制[11]。提高检测灵敏度的常用方法有:采用高灵敏度的检测器[12]、使用离线富集技术和在线富集技术[13,14]等。激光诱导荧光检测器具有较高的检测灵敏度,但是对待测物繁琐的衍生过程和高昂的成本限制了其广泛应用。离线富集技术需要对目标分析物进行过滤、萃取、吸附等前处理以提高检测灵敏度,该方法试剂消耗量大、操作过程繁琐。在线富集技术则是通过调节目标分析物所处状态以及仪器参数使分析物得到高倍富集,从而达到提高检测灵敏度的目的,具有操作简便、价格低廉等优点。……