试析高效液相色谱法测定启脾丸中橙皮苷的含量

孙未娜

【摘  要】目的：对高效液相色谱法测定启脾丸中的橙皮苷的含量进行测定。方法：在测定的方法中使用的色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C 18（4.6 mm×150 mm，5μm），其流动相为0.2molL-1醋酸铵-冰醋酸-甲醇的比例为57.24∶2.76∶40，柱温为23度，设置成流速为0.8ml min-1，最后检测其波长的长度为285nm，进样量使用的是外标峰面积法进行定量。结果：经过测试后发现橙皮苷的保留时间可以达到5.6min，进样量在0.04μg～0.36μg之间，具有良好的内线性关系，经过计算可以得出其平均回收率为95.878%，RSD=1.963%。结论：使用高效液相色谱法对启脾丸中橙皮苷的含量进行测定，不仅操作起来高效，而且具备重现性好的优点，最后的结果达标，因此可以用于启脾丸的质量控制。

【关键词】高效液相色谱法;启脾丸;橙皮苷;含量测定

启脾丸的主要成分是人参、茯苓、甘草、陈皮、山药、山楂、六神曲、麦芽等，其主要的功能是健脾护胃、促进消化等功效，尤其是对胃肠功能较差的患者具有较强的调节功能。其中白术、陈皮、茯苓和甘草对肠道的平滑肌具有较好的调节作用;而白术、茯苓多肝又具有很好的保护功能，同时还可以对胃肠虚弱的症状起到良好的改善作用，对肠道感染具有一定的抑制作用。对于脾胃虚弱和消化不良等症状具有较为明显的疗效。基于启脾丸在临床上的重要作用，其质量的高低对治疗会有较高的影响，本文采用HPLC法对启脾丸中的橙皮苷进行了详细的测定，其方法具有操作简单方便且对成分的分离效果好，测验结果的误差也较小。

1仪器与试药

1.1仪器

Agilent 1200型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），ZORBAX Eclipse XDB-C 1 8色谱柱（4.6×150mm，5μm），高压四元泵，自动进样器，二极管陈列检测器DAD1 DL-720D数控超声波清洗器（上海之信仪器有限公司），M ETTL ER TOL EDO电子天平（德国）。

1.2试药

甲醇（色谱纯，山东禹王实业有限公司化工分公司），甲醇（分析纯，天津市光复科技发展有限公司），冰醋酸（分析纯，上海中秦化学试剂有限公司），乙酸铵（NH 4 A C）（分析纯，天津市标准科技有限公司），甘草酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110731-200409，约5 mg），启脾丸（兰州佛慈制药股份有限公司，批号：20081、20086、20089），水为娃哈哈纯净水经蒸馏得。

2方法与结果

2.1色谱条件

固定相为ZORBAX Eclipse XDB-C 18（4.6 mm×150 mm，5μm），流动相为0.2 molL-1醋酸铵-冰醋酸-甲醇（57.24∶2.76∶40），检测波长为285 nm，流速為0.8 mLmin-1，进样量为5μL，柱温为23℃（室温）。

2.2溶液的配制

2.2.1对照品溶液配制取橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇（色谱纯）制成每1 mL含40μg的溶液。

2.2.2在对样品溶液进行配置时，需要取启脾丸3g，对样品经过精密后使用研钵进行精细的研磨，最后使用20ml的甲醇进行定量转移，转移至25ml的容量瓶中，提取30分钟，对其进行冷却后使其温度降至室温即可，加入甲醇，加入量以刻度为准，再对液体进行摇匀和静置，并取出上清液，最后使用孔径为0.45μm的微孔过滤膜对溶液记性过滤，将初滤液进行去除，剩下的续滤液留置瓶中。

2.2.3阴性样品溶液的配制按处方比例称取除去陈皮的其他药材，依照启脾丸的制备工艺和制备样品溶液的方法制备阴性样品溶液。

2.3专属性试验

分别精密吸取对照品溶液、样品溶液、阴性样品溶液各5μL，按2.1项下色谱条件进样测定，样品溶液和对照品溶液色谱图上有一保留时间相同的特征色谱峰，保留时间为1 0.34 min，而阴性样品溶液在此保留时间无此特征峰，如附图1。

2.4标准曲线的绘制及线性范围考察

分别精密吸取2.2.1项下的对照品溶液（浓度为40μgmL-1）1、3、5、7、9μL注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，得橙皮苷线性回归方程为Y=429.23 X-206.79，r=0.9998，结果表明：橙皮苷在0.04μg～0.36μg范围内线性良好。

2.5样品含量测定

需要取启脾丸的样品3.0g，对样品经过严谨的称量和研细，再将20ml的甲醇转移到25ml的大小的瓶子中，使用超声对其进行提取，时间为30min，在对其进行冷却直至达到室温为止，使用甲醇进行定容，最后对甲醇进行混匀。用孔径为0.45μm的滤微孔过滤膜滤掉并且去除初滤液，取得续滤液组后即可得到样品溶液。然后对该溶液进行精密吸取5μL，将高效液相色谱仪注入其中，将色谱图记录下来，其色谱图的结果如表1 所示，在进行外标法计算出每1g的启脾丸样品中含有的橙皮苷的量。

2.6精密度试验

分别精密吸取同一浓度的橙皮苷对照品溶液5μL，按上述色谱条件重复进样5次，记录色谱图，结果RSD=1.179%，结果表明该方法精密度良好。

2.7稳定性试验

分别精密吸取批号为的供试品溶液5μL，每隔进样次，共进样5次，记录色谱图，结果RSD=3%表明供试品在内基本稳定。

2.8重复性试验

取同一批号（20081）样品共5份，分别精密称定，按2.2.4项下样品溶液的制备方法制备，按2.1项下色谱条件下分别进样分析，记录色谱图，外标法计算每份样品中甘草酸的含量，RSD=1.21 22%。

2.9回收率试验

采用加样回收法，分别精密称取已知含量为416.155 7μg g-1的同一批号（20081）样品适量，共9份，分别精密加入一定量的橙皮苷对照品，按2.2.2项下方法制备样品溶液，按2.1项下色谱条件下分别进样分析，结果如表2，平均回收率为95.8778%，RSD=1.963%。

3小结

通过高效液相色谱法对启脾丸中橙皮苷的含量进行测定后，可以得出以下结论：橙皮苷的保留时间可以达到5.6min，其进样量可以达到0.04μg～0.36μg之间并且具有稳定且良好的内线性关系，使用其回收率的计算公式进行计算可以得其平均回收率为95.878%，RSD=1.963%。通过高效液相色谱法对启脾丸中的额橙皮苷进行测定可以得出以下总结，其方法不仅操作起来十分的便捷，还具有良好的重现性，最终达到满意的测定效果，可以很好的应用于对启脾丸的质量控制。

参考文献

[1]寇亮.高效液相色谱法测定启脾丸中橙皮苷的含量[J].西北民族大学学报（自然科学版），2009（04）：5-7.

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[3]吴丽璇.高效液相色谱法测定藿香正气水中橙皮苷的含量[J].中国药师，2006，9（1）：43-44.