Salusin-β 对血管内皮细胞氧化应激的影响

刘宣宣

（南京医科大学康达学院生理与病生教研室 江苏 连云港 222000）

Salusins 是由Shichiri 等于2003 年发现的一类内源性心血管调节肽，包含由28 个氨基酸残基组成的Salusin-α 和20 个氨基酸残基组成的Salusin-β[1]。Salusins 具有降低血压、心率和心输出量[1]、促进心肌细胞生长、保护心肌细胞、影响动脉粥样硬化的发生和发展、促进血管平滑肌细胞增殖和血管内皮细胞的炎症反应等作用[2]。引发血管内皮功能障碍的原因主要有氧化应激、炎症等[3]，因此，本研究通过体外培养原代人脐静脉内皮细胞（HUVECs），孵育Salusin-β 和Antisalusin-β，并测定细胞内ROS 含量和NADPH 酶含量变化，探讨Salusin-β 在HUVECs 氧化应激中的作用。

1.材料与方法

1.1 细胞

人脐静脉内皮细胞（HUVECs）购自ScienCell Research Laboratories。

1.2 试剂

Salusin-β 购自Phoenix pharmaceuticals（Belmont，CA，USA），Anti-salusin-β 抗体购自Clound-Clone Corp 公司，光泽精和NADPH 均购自sigma 公司。

1.3 实验方法

HUVECs 随机分对照组（Saline），Salusin-β（10-7mol/L）组和Anti-salusin-β（10-7mol/L）组，孵育48 小时后，细胞匀浆后离心10 分钟（4℃，3000rpm），取上清液用化学发光法测定超氧阴离子水平并用Bradford 法测定蛋白质含量。用加入SOD（350U/ml）的改良HEPES 缓冲液稀释待测样本的上清液，加入NADPH（100μM）和光泽精（5μM）后，用化学发光仪每隔1分钟测一次发光值，共测10 次，计算出每分钟每毫克蛋白的平均发光值。

1.4 统计学方法

用SPSS 20.0 软件对数据进行统计分析，所有数据以均值±标准差表示，组间差异采取单因素方差分析，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2.结果

2.1 Anti-salusin-β 抑制HUVECs ROS 和NADPH 酶表达

结果显示（图1）：Salusin-β 作用于HUVECs 后，细胞内NADPH 酶含量（图A）和ROS 含量（图B）无显著变化，Antisalusin-β 作用于HUVECs 后，细胞内NADPH 酶含量（图A）和ROS 含量（图B）显著降低（*P＜0.05，n=6）。

图1 Salusin-β 和Anti-salusin-β 孵育HUVECs 48 小时后，细胞内NADPH 酶含量（图A ）和ROS 含量（图B）的变化。

3.讨论

Salusin-β 在心血管、内分泌和免疫系统等发挥多种功能，是具有重要生理和病理生理学意义的内源性调节肽。研究显示，血管内皮功能损伤是动脉粥样硬化（AS）早期临床表现，在动脉粥样硬化斑块中Salusin-β 高表达[4]，而氧化应激是动脉粥样硬化发展的重要原因[5]，ROS 能够增强细胞氧化应激，促进炎症介质释放、低密度脂蛋白氧化，破坏凝血功能平衡等。有研究表明，氧化应激在内皮功能障碍发生机制中起着重要作用[6]。因此，本实验主要探究Salusin-β 是否介导HUVECs 的氧化应激，结果显示，Salusin-β 对正常HUVECs 并未发现直接作用，但是用Anti-salusin-β 清除HUVECs 内源性Salusin-β 以后，细胞内ROS 和NADPH 酶的含量明显下降，提示Salusin-β 对于HUVECs 的氧化应激可能具有一定的促进作用，具体机制有待进一步研究。