两种酒精依赖SD大鼠模型制备的比较

安子宜 李齐 杨勇

【摘 要】 目的：建立两种酒精依赖SD大鼠模型，并探讨其优缺点，为制备酒精依赖动物模型提供实验依据。方法：根据不同模式建立两种SD大鼠酒精依赖模型。结果：两种模式都能成功建立酒精依賴动物模型。结论：两种酒精依赖模型均能开展相关实验研究，10%酒精依赖模型组焦虑状态更明显，成模型效果更好，更适宜进行酒精依赖后短期戒断实验研究。

【关键词】 酒精依赖模型;高架十字迷宫

【中图分类号】 R749   【文献标志码】A   【文章编号】1005-0019（2020）17-088-01  酒精依赖已成为严重的公共卫生问题[1]。全世界约有230万人死于与酒精有关的疾病 [2]。目前国内外常用的建立酒精依赖动物模型包括自由饮、灌胃、腹腔注射等方式[3] ，本研究采用自由饮方式建立了两种酒精依赖动物模型，并进行分析比较，为酒精依赖相关的分子生物学研究提供科学的实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 采用体重为170～200g（6周龄）的SPF级雄性SD大鼠30只，自辽宁长生生物技术有限公司【SCXK（辽）2015-0001】购买。于牡丹江医学院实验动物中心SPF级鼠类实验室【SYXK（黑）2019-006】进行动物模型的构建及检测。

1.1.2 试剂及仪器 无水乙醇;高架十字迷宫

1.2 方法

1.2.1 酒精依赖动物模型的构建 30只SPF级雄性SD大鼠单笼饲养在SPF级动物室，光照/黑暗周期为12h。实验前大鼠用Excel软件随机分为3组，每组10只，分别为（A）对照组，（B）20%酒精依赖模型组和（C）10%酒精依赖模型组。

1.2.1.1 20%酒精依赖模型组的构建 B组为双瓶自由间歇性饮酒模型，第一天9：00双瓶分别为蒸馏水和20%酒精溶液，24h时后测量饮水量（ml/24h）和饮酒量（ml/24h），并将20%酒精瓶替换为水瓶，此时，大鼠饮用双瓶水。如此反复交替，为了防止位置偏爱对实验的影响，每次交替水瓶和酒瓶的位置，共28天。

1.2.1.2 10%酒精依赖模型组的构建 C组为双瓶自由连续性饮酒模型，一瓶为蒸馏水，一瓶为10%酒精溶液，每天9：00测量饮水量（ml/24h）和饮酒量（ml/24h），记录数据并更换水瓶和酒瓶的位置，所有溶液每天更新一次，连续造模4周，共28天。

1.2.2 高架十字迷宫检测 在最后一次饮酒24h后，将3组大鼠置于安静、昏暗且光线恒定、温度恒定在24℃的实验室内。大鼠于高架十字的中央处开始测试，测试时间为3min。实验参数包括：总路程（总活动度）;开臂进入次数;开臂进入次数百分比;开臂滞留时间;开臂滞留时间百分比等。

1.2.3 酒精戒断综合征评分（EWS） 在撤出酒精24h、48h和72h后对三组大鼠进行酒精戒断行为学观察评分。观测项目包括刻板行为、激惹性、尾巴强直、异常姿势和听源性癫痫发作情况，该5个项目相加为总的评分，评分越高说明戒断症状越严重。

1.3 统计学方法 统计分析采用SPSS 23.0软件，数值变量资料以均数±标准差表示，多组组间比较采用单因素方差分析（ANOVA），以P<0.05为差异具有统计学意义，两组间比较采用LSD检验，绘制统计图运用Graphpad Prism 7.0。

2 结果

2.1 造模期间两个模型组的饮酒量和饮酒偏好 在双瓶自由饮模式下，B组经过14次循环间歇饮酒的酒精摄入量逐渐增加，最后到达平台期（17.20±0.82）ml/24h，而饮水量随着饮酒量的增加而下降，直至稳定在（12.95±1.23）ml/24h，酒精偏好增加到（57.10±3.06）%，见图1（A和B）。C组经过28次连续饮酒在最后7天的酒精摄入量（16.45±0.85）ml/24h保持稳定，饮水量稳定在（11.91±0.66）ml/24h，酒精偏好稳定在（58.0±0.23）%，没有统计学差异，见图1（C和D）。

2.2 高架十字迷宫测试比较各组行为学变化 在模型组最后一次饮酒24h后，对B、C组和A组大鼠进行高架十字迷宫检测。大鼠在开放臂的探索时间增加，表示其焦虑程度较低;若大鼠在开放臂的探索时间减少，则表示其焦虑程度相对较高，选取焦虑程度较高的大鼠为酒精依赖成功模型。高架十字迷宫检测结果情况见表1图2。

2.3 酒精戒断评分评估大鼠的戒酒症状 撤出酒精24h、48h和72h后对大鼠进行酒精戒断行为学观察评分见表2。

3 讨论

成功建立动物模型是进展实验研究的关键步骤。酒精依赖动物模型以自由饮方式进行构建模型，避免了连续腹腔注射引起的感染，大大降低了动物死亡率[4]。本实验选用SD大鼠品系制备10%双瓶连续饮酒和20%双瓶间断饮酒两种不同的酒精依赖动物模型。两种酒精依赖模型均能开展相关实验研究，10%酒精依赖模型组焦虑状态更明显，成模型效果更好，更适宜进行酒精依赖后短期戒断实验研究。

参考文献

[1] Müller CP， Chu C， Qin L， et al. The Cortical Neuroimmune Regulator TANK Affects Emotional Processing and Enhances Alcohol Drinking： A Translational Study[J]. Cereb Cortex， 2019， 29（4）： 1736-1751.

[2] Charlet K， Heinz A. Harm reduction-a systematic review on effects of alcohol reduction on physical and mental symptoms[J]. Addict Biol， 2017 ， 22（5）： 1119-1159.

[3] 王睿哲. 外侧缰核和伏隔核DNMT1和PRMT1表达在大鼠酒精依赖中的作用[D].吉林大学，2019.

[4] Deal AL， Konstantopoulos JK， Weiner JL，et al. Exploring the consequences of social defeat stress and intermittent ethanol drinking on dopamine dynamics in the rat nucleus accumbens[J]. Sci Rep， 2018， 8（1）： 332.