日粮中添加沼泽红假单胞菌对生长牛生长性能和血液生理生化指标的影响

易洪斌，丁松林，张海波，郭敏红，潘建珍

（1.宜春学院生命科学与资源环境学院，江西宜春 336000；2.江西省庆盛农牧有限公司，江西宜春 336000）

沼泽红假单胞菌（Rhodopseudomonas Palustris）是光合细菌中应用与研究最为广泛的一种适应性强的光合细菌[1]，属于红螺菌目、红螺菌科、红假单胞菌属，是我国农村农业部批准允许直接饲喂动物的一种光合细菌，用以生产光合细菌饲料添加剂。沼泽红假单胞菌营养成分丰富、组分较齐全，细胞干物质中蛋白质含量达61.24%，富含16 种氨基酸以及多种B 族维生素、大量类胡萝卜素、辅酶Q 等多种生理活性物质[2-3]，具有净化水质、抑制病原菌繁殖、调节动物胃肠道菌群平衡、抗氧化、增强免疫、提高动物生产性能等多种功能[4-7]。易洪斌等[8]研究发现，在蛋鸡饮水中添加沼泽红假单胞菌可显著提高蛋鸡的产蛋率和日产蛋量，促进饲料的消化吸收，提高蛋鸡抗病抗应激能力；刘磊等[9]发现在仔猪日粮中添加沼泽红假单胞菌可明显提高养殖效率，并有效降低仔猪粪便排泄物中的氨氮、硫化物、亚硝酸盐等有害物质的含量；薛志成[10]研究发现，在奶牛日粮中添加沼泽红假单胞菌可提高不同生理时期奶牛的产奶量，使患胃肠道疾病奶牛症状逐渐消失并恢复产奶量。

牛瘤胃内微生态平衡失调，原有优势菌群发生更替，便出现生长性能下降和疾病状态，是肉牛养殖过程中的一种常发性疾病，给肉牛养殖造成巨大的经济损失；而微生态制剂能补充胃肠道有益菌，促进瘤胃和肠道菌群平衡，调节瘤胃和肠道健康水平，提高动物的生长性能和抗病抗应激能力。微生态制剂沼泽红假单胞菌绿色、安全、环保，生产工艺简单，成本低廉，经济效益明显，使用方便，但在肉牛养殖方面应用很少，也未见有关沼泽红假单胞菌对牛血液生理生化指标影响的研究报道。本试验旨在研究沼泽红假单胞菌对生长牛生长性能和血液生理生化指标的影响，为沼泽红假单胞菌在肉牛养殖方面的推广应用提供指导和科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料 沼泽红假单胞菌液由宜春学院生产提供，活菌含量为3×109CFU/mL，在塑料大棚中利用太阳光于敞开的白色塑料桶中进行发酵培养生产，将培养基溶解于一定比例的水中，pH 调至7，按30%比例接种菌种，每天搅拌一次并除去表面菌膜。

1.2 试验设计 在江西省庆盛农牧有限公司选择8 月龄健康的的西门塔尔与本地黄牛杂交生长牛40 头，平均体重（151.87±6.25）kg，随机分成4 组，每组10 头，其中公牛4 头，母牛6 头，组间平均起始体重差异不显著。对照组不添加菌液，处理组于精料中每头添加100、200、300 mL/d 沼泽红假单胞菌液，搅拌均匀饲喂，预试期7 d，正试期80 d。精料组成及营养成分见表1，粗料为青贮皇竹草（干物质基础：干物质28.81%，粗蛋白质12.60%，中性洗涤纤维62.21%，酸性洗涤纤维37.03%）。

1.3 饲养管理 试验牛分组后进行圈养舍饲，预试期间进行编号、驱虫、健胃和常规免疫，每天早、晚各饲喂1 次，饲喂顺序为先精后粗，自由饮水。精料的饲喂量为肉牛体重的1%供给，粗饲料饲喂量以牛只吃饱后略有剩余为准。

表1 精料组成和营养成分（干物质基础）

1.4 测定指标及方法

1.4.1 生长性能 正式试验开始和试验结束时，晨饲前对试验牛空腹称重，记录每头牛试验初重和末重，并计算每头牛的平均日增重（ADG），同时记录正试期每天每组的采食量，计算干物质采食量（DMI），观察试验牛的生长情况。

1.4.2 血液生理生化指标 试验结束时对试验牛颈静脉采血，一管以EDTA 为抗凝剂，用全自动血细胞分析仪（日本希森美康公司产Sysmex XN-430）测定全血的白细胞（WBC）计数、淋巴细胞（LYM）计数和百分比、中间细胞（MID）计数和百分比、中性粒细胞（GRAN）计数和百分比、红细胞（RBC）计数、血红蛋白（HGB）、红细胞压积（HCT）、红细胞平均体积（MCV）、平均血红蛋白含量（MCH）等血液生理指标。

另一管以肝素锂为抗凝剂分离血浆，用全自动生化分析仪（美国爱德士生物科技公司产IDXX Catalyst one）测定血浆白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）、血糖（GLU）、碱性磷酸酶（ALP）、谷丙转氨酶（ALT）、尿素氮（BUN）、肌酐（GREA）、钙（Ca）、磷（P）、钠（Na）、钾（K）、球蛋白（GLOB）等血液生化指标，试剂盒由光宝科技股份有限公司（台湾）提供。4 h 内完成血液生理生化指标的测定。

1.4 统计分析 用SAS9.1 软件对试验数据进行单因子方差分析，Duncan's 法进行多重比较检验。统计结果用平均值±标准差表示。P>0.05 表示差异不显著，P<0.05表示差异显著。

2 结果

2.1 沼泽红假单胞菌液添加水平对生长牛生长性能的影响 从表2 可见，与对照组比较，100、200、300 mL/d 沼泽红假单胞菌液组牛的平均日增重分别提高4.17%（P>0.05）、12.26%（P<0.05）和11.35%（P<0.05），而干物质采食量均有提高（P>0.05），以300 mL/d 沼泽红假单胞菌液组最高，耗料增重比均降低（P>0.05）。试验进行2 周后观察到，200、300 mL/d 沼泽红假单胞菌液组牛表现毛柔顺有光泽，粪便成型好，排便顺畅。

2.2 沼泽红假单胞菌液添加水平对生长牛血液生理指标的影响 从表3 可见，100 mL/d 沼泽红假单胞菌液组牛的血液生理指标与对照组均无显著差异。与对照组比较，200、300 mL/d 沼泽红假单胞菌液组血液LYM 计数显著提高，提高了血液WBC 计数和LYM%（P>0.05），降低了血液MID 和GRAN 计数及其百分比（P>0.05）。

2.3 沼泽红假单胞菌液添加水平对生长牛血液生化指标的影响 从表4 可见，100 mL/d 沼泽红假单胞菌液组牛的血液生化指标与对照组均无显著性差异。与对照组比较，200、300 mL/d 沼泽红假单胞菌液组牛的ALT含量显著降低，血钙含量和钙/磷显著提高，同时提高了血液ALP、GLU 和GLOB 含量（P>0.05），降低了血液BUN、GREA 和血磷含量（P>0.05）。

3 讨 论

3.1 沼泽红假单胞菌对生长牛生长性能的影响 刘丽等[6]研究报道，沼泽红假单胞菌能显著降低养殖水体中大肠杆菌、沙门氏菌和志贺氏菌数量，也显著降低鸭血液中的内毒素，极显著提高鸭空肠绒毛长度，从而促进肠道对营养物质的消化吸收，提高肉鸭生长性能。本试验中，沼泽红假单胞菌液添加水平达到每头200 mL/d 及以上时，日增重明显高于对照组，毛柔顺有光泽，粪便成型更好，排便更顺畅，这与沼泽红假单胞菌在其他动物中的应用研究结果一致[8-10]。这是由于沼泽红假单胞菌营养成分丰富、组分较齐全并富含多种生理活性物质[2-3]，降低了粪便排泄物中有害物质的含量，消除了有害物质对动物胃肠道刺激作用，调节了动物胃肠道正常菌群，竞争性地抑制和颉颃病原菌，从而促进动物生长，提高其抗病抗应激能力[9]。

表2 沼泽红假单胞菌液添加水平对生长牛生长性能的影响

3.2 沼泽红假单胞菌对生长牛血液生理生化指标的影响血液生理生化指标可以反映机体的健康状况，血液中任何有形成分的变化都会影响到组织器官功能。在免疫应答过程中，LYM 是发挥免疫功能的最主要细胞，其数量变化可反映出机体免疫功能水平的高低，LYM 升高表明免疫功能增强，意味着对病原微生物的抵抗力增强[11]；MID和GRAN 具有趋化、吞噬和消化作用，参与机体的炎症反应和免疫防御机制。本试验中，沼泽红假单胞菌液添加水平达到每头200 mL/d 及以上时，血液LYM 计数显著高于对照组，而血液MID 计数和GRAN 计数低于对照组，表明沼泽红假单胞菌因富含多种营养物质和生理活性物质，可明显增强机体的免疫功能，同时提高机体的抗氧化作用，平衡机体的各项功能，提高动物的抗病抗应激能力，这与抗氧化物类胡萝卜素研究结果有相同之处。光合细菌细胞膜上分布着大量的光合色素——类胡萝卜素，是生产提取类胡萝卜素的原料，沼泽红假单胞菌类胡萝卜素的含量占细胞干重达4.243 mg/g[2]，并具有较强的抗氧化活性[12]；毕宇霖等[13]研究发现，在肉牛日粮中添加β-胡萝卜素降低了血液LYM、GRAN 和MID计数，提高了血液LYM%，同时显著提高血清GSH 含量、T-SOD 活性和T-AOC，显著降低血清MDA 含量，从而明显提高肉牛抗氧化、抗应激、抗病等能力。

机体血液中ALT 来源于肝脏，是肝功能检测的重要指标，通常用其值的大小来判断肝脏是否受损伤，ALT 含量升高显示机体肝功能可能受损。本试验中，沼泽红假单胞菌液添加水平达到每头200 mL/d 及以上时，血液ALT 含量显著低于对照组，显示沼泽红假单胞菌类胡萝卜素具有很强的抗氧化作用，使肝脏免受各种有害物质的损伤并能修复受损肝脏，保护肝脏功能，这与β-胡萝卜素保护肝脏研究结果一致。曲蕙名等[14]用H2O2诱导的斑马鱼肝损伤试验表明，β-胡萝卜素能抑制ALT 和AST 的升高，提高SOD 活力，降低MDA含量，显著改善斑马鱼肝脏组织病理形态，提高Nrf2 mRNA 的相对表达量，上调抗氧化基因的相对表达量，从而对H2O2诱导的斑马鱼肝损伤具有保护作用。

钙、磷共同参与骨骼的构建，在骨代谢中存在相互作用。普通牛正常血钙含量为2.25～2.75 mol/L，血磷含量在生长牛为1.94～2.58 mol/L，而成年牛为1.29～3.55 mol/L[15]，钙/ 磷比为1:1～2:1。本试验中，试验牛血钙和血磷含量都在正常范围内，而对照组和100 mL/d 沼泽红假单胞菌液组牛的血液钙/磷却低于正常范围，但沼泽红假单胞菌液添加水平达到每头200 mL/d 及以上时，显著地提高了生长牛的血钙含量，降低了血磷含量，并显著提高钙/磷，使血液钙/磷趋于正常，其机理有待于研究。

4 结 论

在本试验条件下，生长牛日粮中添加沼泽红假单胞菌可显著提高其日增重、血液LYM 计数、血钙含量和钙/ 磷，显著降低ALT 含量，本试验条件下，最佳添加水平为每头200 mL/d 沼泽红假单胞菌液。