观察精液放置时间对精子冷冻复苏率的影响

王玉婷　许成盛　宋晶晶　教郁

【摘 要】目的：本次实验将采用针对精液放置时间的差异性，其对精子冷冻复苏率所产生的影响。方法：本次实验选取了2018年7月-2018年12月前来本院生殖科助孕剩余精子为研究样本，患者均签署剩余配子处理知情同意书，选择用于科研目的。对标本进行储存，分别放置不同时间后进行冷冻实验，并在冷冻24小时后实施复苏实验，对比精子放置时间对精子冷冻复苏的影响。结果：从放置时间的长短上看，在5小时内，精子的复苏率较好，而放置超过5小时，其复苏率较低，也就是说，随着精子放置时间的延长，其复苏率越来越低，具有反比例关系。结论：在收集到精液样本后，我们建议在1小时内进行冷冻处理，如果由于其他因素需要放置，则建议放置时间不超过5小时，确保精子冷冻后具有良好的复苏率。

【关键词】精液;放置时间;精子;冷冻复苏率

【中图分类号】R814 【文献标识码】B 【文章编号】1005-0019（2020）10-201-01

随着医疗技术的进步，精子冷冻技术也从常规方案发展为单精子冷冻，并日益成熟。而精子冷冻技术指的是，对精子加入保护液并放置在-196℃的液氮内，在低温条件下促使其保存活性，并在需要使用时采用复苏技术唤醒[1]。而各个国家更是建立了精子库，其主要提供精子保存、外供精子两个部分的内容，能够为计划生育、不育患者等提供临床服务。本次实验选取了2018年7月-2018年12月前来本院生殖科助孕剩余精子为研究样本，在其取精之后将液体标本进行分类储存，放置不同时间后进行冷冻实验，进一步分析冷冻后的复苏率，更好地指导精子冷冻工作，提高质量控制。

1 资料与方法

1.1 一般資料

本次实验选取了2018年7月-2018年12月前来本院生殖科助孕剩余精子为研究样本，患者均签署剩余配子处理知情同意书，选择用于科研目的。在其取精之后将液体标本进行分别储存，放置不同时间后进行冷冻实验。其中，精子捐献者的年龄在20-35岁之间，将年龄偏大，以及患有遗传性疾病的人群剔除，能够确保精子本身质量得到保障。此外，尚未排除不孕症、血液传染性疾病、以及慢性疾病患者，助孕患者均在3-7天内禁欲，精液体积超过3ml。本次实验得到了本院伦理委员会的批准。

1.2 实验方法

在助孕患者取得精液之后对剩余精液进行标本的回收，并在1小时内进行精液提及、颜色、粘稠度以及密度等方向的分析。在将每份精液样本进行平均分配后，放在37℃的恒温板上，其收取时间为每隔1小时，对其进行精子冷冻实验，并在6小时内完成。在冷冻上，则需要将保护剂和精液原液进行成分的混匀，并采用人工降温液氮熏蒸法将其冷冻[2]。随后，精子在冷冻后24小时，可以将其从液氮罐中取出，并放在37℃的温水中进行复苏，记录精子密度。

1.3 评价标准

本次实验可以进行手工计数和计算机计数两种方式，对冷冻前后的精子密度等数据进行记录，以便完成复苏后的对比分析。在手工计数上，则需要吸取10ul的精液放置在精子计数板上，在显微镜下观察精子密度;而计算机计数则是将同等的精液放置在精子计数板上，并采用计算机系统分析精子密度以及向前精子百分率。

1.4 统计方法

在本研究中对精子冷冻复苏率结果进行讨论，在统计的过程中，以SPSS19.0专业计算软件为基础，确保实验数据的准确性、可靠性。在临床数据的对比中，首先要对不同冷冻时间下精子复苏情况做好记录，在本次实验中在复苏率上则为计数统计，以P<0.05为具有统计学意义。

2 结果

从放置时间的长短上看，在5小时内，精子的复苏率较好，而放置超过5小时，其复苏率较低，也就是说，随着精子放置时间的延长，其复苏率越来越低，具有反比例关系。

据统计，在本次实验中，精液放置1小时的精子冷冻复苏率为（51.88±3.25）%，2小时则为（46.36±2.52）%，3小时则为（46.25±3.75）%，4小时则为（45.63±2.63）%，5小时则为（42.21±2.72）%，6小时则为（36.24±3.52）%。

3 讨论

人类精子库的建议，其可以治疗不孕不育，可以预防遗传疾病，并利用超低温冷冻技术可以对其进行检测、保存。但是影响精子冷冻后复苏率的因素也有很多，包括保护剂的应用、冷冻方式、保存期限、冻储温度[3]。将精子集中保存，其精液标本量大，且防止时间长。其次，在操作过程中，人员和设备情况有限，大批量的冷冻标本也会造成现实上的困难。这些都会导致精子冷冻前，精液标本的放置时间长[4]。

在不断规范我国精子库精子质量的过程中，其精子数量、活力、复苏率均设置了下限。解决精液静置时间，这对复苏率的改善和提升具有积极作用。从本次研究中看，精液放置时间会对复苏结果有直接影响，如果液化放置时间长，复苏率则有必然的下降趋势。同时有学者也做了相关研究，即在5小时内冷冻精子，其复苏率处于可接受的范围，反之，超过5小时，效果则有明显下降。

综上所述，在收集到精液样本后，我们建议在1小时内进行冷冻处理，如果由于其他因素需要放置，则建议放置时间不超过5小时，确保精子冷冻后具有良好的复苏率。

参考文献

[1]陈碧，张维，马天仲，等.取精后至冷冻前的间隔时间对精子冷冻复苏效果的影响[J].中国医学创新，2016，13（11）：1-4.

[2]董世桃. 液氮缓慢冷冻方法对精液冷冻复苏后精子活力的影响[J]. 中外医学研究，2018，16（07）：162-164.

[3]张宁， 闫素文， 崔鑫. 建立平战结合军人精子库应对战争和突发事件对军人生殖系统的损伤[J].解放军医药杂志， 2014（26）：62-64.

[4]World Health Organization. WHO laboratory manual for theexamination and processing of human semen [M]. 5th ed.London：Cambridge University Press， 2010.