老年心力衰竭合并肺部感染患者血清lncRNA NEAT1、miR-129表达及其临床意义

钟聪敏，谢肖立，王肖雅，孙爽，陈兢兢，卓杰

(1.保定市第一医院老年病科，河北 保定 071000； 2.河北医科大学第二医院消化内科，石家庄 050000)

多种心血管疾病在终末期阶段均可发展为心力衰竭，随着年龄增长，发病率急速上升，肺部感染是心力衰竭患者的主要表现之一，而老年人群是肺部感染的好发人群，肺部感染会加重心力衰竭，故应及早发现和治疗老年心力衰竭合并肺部感染，检测其灵敏指标对于心力衰竭合并肺部感染具有重要意义[1-2]。长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA) 核富含丰富的转录本1(nuclear-enriched abundant transcript 1，NEAT1)广泛表达于真核生物体内，参与各种生物学过程。近年来研究发现，lncRNA 与多种心血管疾病的发病密切相关，血浆IncRNA可能成为心力衰竭的潜在生物标志物[3-4]。lncRNA NEAT1是lncRNA家族成员之一，其表达水平在多种肿瘤疾病中存在变化[5-6]。微RNA(microRNA，miRNA/miR)是一种内源性非编码小分子RNA，广泛存在于真核生物中，在调控基因表达中具有复杂性和多效性[7]。miR-129在细胞生长、发育、癌变等生命过程中有重要作用[8]，但对于lncRNA NEAT1、miR-129在老年心力衰竭合并肺部感染中的研究较少见报道。本研究旨在通过探讨老年心力衰竭合并肺部感染患者血清lncRNA NEAT1、miR-129表达水平变化及意义，以期为临床老年心力衰竭合并肺部感染临床治疗提供参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2014年9月至2019年4月保定市第一医院老年病科收治的260例老年心力衰竭患者为研究对象，依据是否发生肺部感染分为观察组(肺部感染，n=124)和对照组(未发生肺部感染，n=136)。纳入标准：①符合心力衰竭相关诊断标准[9]；②60岁以上；③无严重肝肾疾病及免疫性疾病。排除标准：①合并其他慢性呼吸系统疾病者；②患有代谢性疾病者；③恶性肿瘤者；④严重营养不良者；⑤患有精神疾病者。本研究经保定市第一医院伦理委员会批准，患者及家属均签署知情同意书。

1.2主要试剂与仪器 试剂包括2.5×Real Master Mix试剂(KT201)[天根生化科技(北京)有限公司]；RNA提取试剂盒(15596-026)(美国InvitRogen公司)；仪器包括卡盒式多功能酶标仪[美谷分子仪器(上海)有限公司，型号：SpectraMax Paradigm]、低温高速离心机(美国贝克曼库尔特公司，型号：Allegra X-15R)、全自动化学发光仪(美国雅培公司，型号：Architect i2000)、全自动生化分析仪[罗氏(中国)有限公司，型号：ABBOTT C8000]、实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)分析仪[赛默飞世尔科技(中国)有限公司，型号：Applied Biosystems]、微量分光光度计[赛默飞世尔科技(中国)有限公司，型号：NanoDrop]。

1.3检测指标及方法 采集所有患者清晨空腹静脉血3～5 mL，常温下静置待血液凝固后，以离心半径13.5 cm，2 500 r/min离心15 min，离心后分离上层血清并储存于-20 ℃待用。

1.3.1血清脑钠肽(brain natriuretic peptide，BNP)、降钙素原(procalcitonin，PCT)水平测定 采用全自动化学发光仪及原装试剂测定BNP水平；采用全自动生化分析仪检测PCT水平，所有操作步骤均严格按试剂盒说明书进行。

1.3.2血清lncRNA NEAT1、miR-129表达水平检测 采用实时荧光定量PCR技术检测血清lncRNA NEAT1、miR-129表达水平。以RNA提取试剂盒提取样本血清总RNA，紫外分光光度法鉴定各样本提取的RNA纯度和完整性。按照反转录试剂盒说明书将血清RNA逆转录合成互补DNA。LncRNA NEAT1上游引物：5′-GUCUGUGUGGAAGGAGGAATT-3′，下游引物：5′-UUCCUCCUUCCACACAGACTT-3′；3-磷酸甘油醛脱氢酶上游引物：5′-CAGCCAGGAGAAATCAAACAG-3′，下游引物：5′-GACTGAGTACCTGAACCGGC-3′。miR-129上游引物：5′-GATACTCACTTTTTGCGGTCT-3′；下游引物：5′-GTGCAGGGTCCGAGG-3′；U6上游引物：5′-CGCTTCGGCAGCACATATAC-3′，下游引物：5′-CAGGGGCCATGCTAATCTT-3′。引物序列均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。实时荧光定量PCR反应体系20 μL：2.5×Real MasterMix 8 μL；上下游引物各0.4 μL，荧光探针0.8 μL；MGB Taqman探针10 μL；互补DNA样本2 μL；加ddH2O至20 μL。选择定量PCR反应程序，共40个PCR循环，定量PCR扩增条件：42 ℃，30 min；94 ℃，5 min；94 ℃，45 s；60 ℃，80 s。以 2-△△CT法计算lncRNA NEAT1、miR-129相对表达量。

1.4统计学方法 采用SPSS 20.0统计学软件进行数据处理，计数资料以例(%)表示，采用χ2检验；计量资料以均数±标准差表示，采用独立样本t检验；采用Pearson法进行相关性分析，P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1两组一般资料比较 两组性别、年龄、心率、高血压及冠心病比例、心功能分级比较，差异无统计学意义(P>0.05)，观察组血清PCT、BNP水平显著高于对照组(P<0.05)，见表1。

表1 两组心力衰竭患者一般资料比较

2.2两组血清lncRNA NEAT1、miR-129表达水平比较 观察组血清lncRNA NEAT1表达水平明显高于对照组，血清miR-129表达水平明显低于对照组(P<0.05)，见表2。

表2 两组心力衰竭患者血清lncRNA NEAT1、miR-129表达水平比较

2.3观察组不同心功能患者血清lncRNA NEAT1、miR-129表达水平比较 心功能Ⅲ级和Ⅳ级患者血清lncRNA NEAT1表达水平显著高于心功能Ⅱ级患者(P<0.05)，心功能Ⅲ级与Ⅳ级患者血清lncRNA NEAT1表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)；心功能Ⅳ级患者血清miR-129表达水平显著低于心功能Ⅱ级和Ⅲ级患者(P<0.05)，见表3。

表3 观察组不同心功能患者血清lncRNA NEAT1、miR-129表达水平比较

2.4观察组血清lncRNA NEAT1、miR-129水平与BNP、PCT水平的相关性 Pearson法分析结果显示，观察组血清lncRNA NEAT1与BNP、PCT水平均呈正相关(r=0.472，P<0.001；r=0.464，P<0.001)，血清miR-129与BNP、PCT水平均呈负相关(r=-0.441，P=0.001；r=-0.507，P<0.001)，见图1～4。

lncRNA：长链非编码RNA；NEAT1：核富含丰富的转录本1；PCT：降钙素原

lncRNA：长链非编码RNA；NEAT1：核富含丰富的转录本1；BNP：脑钠肽

miRNA/miR：微RNA；PCT：降钙素原

miRNA/miR：微RNA；BNP：脑钠肽

3 讨 论

心力衰竭是临床常见疾病之一，主要病理特征为心排血量降低、心肌收缩能力下降等，老年人群的发病率高，肺循环淤血是老年心力衰竭的主要表现之一，导致肺部感染风险增加，肺部感染会显著增加肺循环的阻力，并引发心肌炎症，从而损伤心肌细胞，加重心力衰竭[10-11]。心力衰竭合并肺炎的治疗难度较大，患者病死率较高，因此，临床上应及早发现和辨别心力衰竭患者是否并发肺炎[12]。

血清BNP、PCT是临床中常用的诊断和评估老年心力衰竭合并肺部感染的检测指标之一。BNP由心肌细胞合成并分泌，存在心力衰竭合并肺部感染时，肺部缺血、缺氧及心力衰竭同时作用于心室，加重心肌损伤，导致BNP水平明显升高，对心力衰竭合并肺部感染的诊治具有重要意义[13]。PCT是一种由116个氨基酸组成的多肽，是降钙素的前体物质，当机体存在细菌感染时，外周血PCT水平显著升高，与感染程度呈正相关，可作为判断病情、预后和疗效观察的可靠指标，被认为是新型的炎症标志物。相关研究表明，老年心力衰竭合并肺部感染患者血清PCT、BNP水平明显升高[14-15]。本研究结果显示，观察组血清BNP、PCT水平显著高于对照组，与非感染患者相比，机体感染时，肺部损伤加重，老年心力衰竭合并肺部感染患者血清BNP、PCT水平均明显升高，可作为心力衰竭合并肺部感染的敏感检测指标。

LncRNA是一种非编码RNA，在真核细胞内被普遍转录，其表达具有组织特异性，与动脉粥样硬化、慢性心力衰竭等心血管疾病的发生发展密切相关，并且在人体血浆中已成功检测到lncRNA，是检测心力衰竭的潜在生物学标志物[16-17]。LncRNA NEAT1是一个长的多聚腺苷酸RNA转录本。本研究结果显示，观察组血清lncRNA NEAT1表达水平明显高于对照组，表明老年心力衰竭合并肺部感染患者血清lncRNA NEAT1表达水平明显升高，提示血清lncRNA NEAT1可能在老年心力衰竭合并肺部感染的发生发展中扮演重要角色。进一步Pearson法分析结果显示，观察组患者血清lncRNA NEAT1与BNP、PCT水平均呈正相关，提示血清lncRNA NEAT1可能作为监测老年心力衰竭合并肺部感染的新的生物指标。

目前，血清miRNA检测与分析被认为是一种特异性高、可操作性强的技术，具有表达特异性及稳定性，可能成为新一代的潜在生物标志物。随着研究的深入，miR-129在炎症反应中的重要作用逐渐被发现，具有潜在的疾病监测价值[18-19]。本研究结果显示，观察组血清miR-129表达水平明显低于对照组，表明miR-129可能参与老年心力衰竭合并肺部感染的炎症反应过程，但具体作用机制尚不清楚。进一步行Pearson相关性分析显示，血清miR-129与BNP、PCT水平均呈负相关，提示血清miR-129可能作为新的老年心力衰竭合并肺部感染的临床检测指标。本研究存在样本量小、病例来源局限等不足，研究结果仍需大样本、多中心试验研究的进一步确定。

综上所述，老年心力衰竭合并肺部感染患者血清lncRNA NEAT1表达水平升高，血清miR-129表达水平降低，可能对老年心力衰竭合并肺部感染患者的临床治疗具有一定指导意义。