真姬菇菌糠多糖促进肝癌HepG2细胞凋亡的功能和机制

张 山 董 超 吴澳华 焦凤萍 申 培 李 刚

山东第一医科大学(山东省医学科学院)公共卫生学院,山东 泰安 271016

真姬菇是常见的药食同源食用菌，也是我国食用菌工厂化生产的重要品种之一。其肉厚、味鲜、质韧、口感佳，还有独特的蟹香味，也被称为蟹味菇。在日本民间有“香在松茸、味在玉蕈”的说法。同时它还具有预防衰老、提高免疫力、抗癌、治疗便秘等多种药用价值[1]。

真菌多糖具有一定的抗癌作用和免疫活性[2],真姬菇多糖功能的研究多关注于其抗菌作用和抗氧化功能[3]，而对其抗癌作用研究较少。本研究将采用细胞学实验检测真姬菇菌糠多糖对HepG2细胞增殖的抑制作用和促进HepG2细胞凋亡的作用，采用实时荧光定量PCR技术和Western blot法检测Wnt/β-catenin通路相关分子的基因和蛋白表达水平，以探索真姬菇菌糠多糖是否可以通过Wnt/β-catenin信号通路促进HepG2细胞的凋亡，从而为开发治疗肝癌的辅助药物提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1细胞和多糖溶液 本实验中采用的HepG2细胞为本实验室保存，真姬菇菌糠多糖粉末由山东农业大学贾乐教授提供。

1.1.2主要试剂 1%青霉素链霉素、MTT、Trizol、SYBR Green实时荧光定量试剂盒等购自泰安联星科技有限公司，GAPDH、Bax、β-catenin和Caspase-3等抗体购自Abcam公司，DMEM培养基和胎牛血清FBS等试剂购自泰安华鹏生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1多糖溶液配制 将5 g真姬菇菌糠多糖粉末溶于预热的10 mL双蒸水，37 ℃水浴中溶解1 h。3 000 r/min离心15 min，吸上清，采用0.45 μm、0.22 μm的滤膜2次过滤除菌。硫酸苯酚法测定多糖溶液浓度，将多糖溶液分装至1.5 mL Ep管中， -20 ℃冰箱冷冻保存。……