肝癌组织LncRNATINCR表达水平对术后长期生存的影响

陆悦 唐成武

[摘要] 目的 探討肝癌组织中LncRNA TINCR表达水平对术后长期生存的影响。 方法 回顾性分析2013年4月～2016年2月间在本院接受手术治疗的157例肝细胞肝癌患者的临床资料。RT-PCR 法检测肝癌标本内LncRNA TINCR表达水平，采用ROC曲线和Kaplan-Meier法分析LncRNA TINCR表达水平对肝癌术后长期生存的影响。结果 肝癌组织LncRNA TINCR表达水平对术后长期生存预测的曲线下面积（AUC）为 0.812，特异度为73.77%，灵敏度为79.17%，最佳判读值为1.89（P<0.0001）。根据ROC曲线分析结果，将肝癌组织LncRNA TINCR相对表达水平大于1.89的93例（59.24%）患者纳入高表达组，而肝癌组织LncRNA TINCR相对表达水平小于或等于1.89的64例（40.76%）患者纳入低表达组。Kaplan-Meier法生存分析发现高表达组术后3年内有76例患者死亡，3年总生存率为18.28%（17/93）;低表达组术后3年内有20例患者死亡，3年总生存率为68.75%（44/64），低表达组3年总生存率明显优于高表达组（P<0.0001，两组间死亡风险比为3.7534，95%可信区间为2.5158～5.6000）。 结论 肝癌组织LncRNA TINCR表达水平与肝癌术后长期生存显著相关，LncRNA TINCR表达水平升高则预示着预后不佳。

[关键词] 肝细胞癌;表达;肝切除;长期生存;LncRNA TINCR

[中图分类号] R735.7          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2020）29-0024-04

[Abstract] Objective To explore the effect of the LncRNA TINCR expression level in hepatocellular carcinoma tissues on the long-term survival. Methods The clinical data of 157 patients with hepatocellular carcinoma who received surgical treatment in our hospital from April 2013 to February 2016 were retrospectively analyzed. The expression levels of LncRNA TINCR in HCC specimens were detected by RT-PCR， and the effect of the expression levels of LncRNA TINCR on the long-term survival after HCC surgery was analyzed by the ROC curve and Kaplan-Meier method. Results The AUC， specificity， sensitivity and the optimum interpretation value of the LncRNA TINCR expression levels in hepatocellular carcinoma tissues for prediction of the long-term survival after surgery were 0.812， 73.77%， 79.17% and 1.89（P<0.0001）. According to the ROC curve analysis results， 93 patients（59.24%） with the relative expression levels of LncRNA TINCR in HCC tissues greater than 1.89 were included in the high-expression group， while 64 patients（40.76%） with the relative expression levels of LncRNA TINCR in HCC tissues less than or equal to 1.89 were included in the low-expression group. A total of 76 patients in the high-expression group died within 3 years after surgery， and the 3-year overall survival rate was 18.28%（17/93）， which was found by the Kaplan-Meier survival analysis. In the low-expression group， 20 patients died within 3 years after surgery， and the 3-year overall survival rate was 68.75%（44/64）. The 3-year overall survival rate in the low-expression group was significantly better than that in the high-expression group（P<0.0001， mortality risk ratio between the two groups were 3.7534， 95% confidence interval was 2.5158-5.6000）. Conclusion The expression level of LncRNA TINCR in HCC tissues is significantly correlated with long-term survival after HCC surgery， and the increased expression level of LncRNA TINCR indicates poor prognosis.

[Key words] Hepatocellular carcinoma（HCC）; Expression; Hepatectomy; Long-term survival; LncRNA TINCR

肝癌（Hepatocellular cancer，HCC）目前仍是严重危害国民健康的重大公共卫生难题[1-3]，全世界超过一半的新发HCC病例和死亡病例发生在我国。虽然针对HCC的治疗有了长足的发展，但是根治手术仍是治疗HCC最理想的治愈措施之一[4]。由于在我国大部分HCC发现时已是中晚期，甚至已经侵犯胆道及门脉系统，因此术后复发率高，总体预后很不理想[5-6]。目前亟需进一步探究引起HCC术后复发的易感因素和靶点，从根本上阻断HCC术后复发的通路，达到改善预后的目的。终末分化诱导非编码RNA（Terminal differentiation-induced lncRNA，TINCR）是从人类分化的体细胞中分离得到的一个长3.7 kb的LncRNA转录本[7]。研究发现LncRNA TINCR在肝细胞癌、结直肠癌、胃癌、鳞状细胞癌、膀胱癌、乳腺癌和黑色素瘤等恶性肿瘤中表达异常，并与多种分子相互作用而影响基因转录及转录后过程，可加速肿瘤的发展[8-11]。本研究旨在探讨HCC组织中LncRNA TINCR表达水平对肝癌术后长期生存的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性研究2013年4月～2016年2月在本院行肝癌切除的157例HCC患者的临床资料，纳入标准[12]：未接受任何抗癌治疗;非弥漫性HCC;术后随访6个月以上;无失访情况;所有治疗经患者本人知情同意。排除标准：术前已有肝外转移;术后随访短于6个月。

1.2 肝癌组织LncRNA TINCR相对表达量检测

采用Tissue RNA Kit提取肝癌组织RNA，经反转录后，用于RT-PCR检测组织中TINCR相对表达量，试剂盒均购自南京东极医药科技有限公司，操作过程严格参照说明书进行。TINCR上游引物为5'-CCATC CCTCTGTAACCACCT-3'，下游引物为5'-GTTGGGT-CTAGATTCCAGCA-3'，以Actin为内参，Actin上游引物为5'-ATCATGTTTGCCTAGATCAACA-3'，下游引物为5'-CATCTCTTGCTAAGCGTCCA-3'，引物由上海生工生物工程股份有限公司合成。RT-PCR程序：95℃预变性10 min;95℃ 10 s，60℃ 35 s，72℃，30 s，40个循环;最后72℃延伸10 min。

1.3 随访及观察指标

术后半年内每个月进行随访，之后每3个月1次。随访内容包括体格检查、血常规、生化及肿瘤标记物监测，如有可疑复发，需行超声、增强CT、MRI，必要时行肠镜及穿刺活检确认。一旦确认肿瘤复发，记录复发的时间及部位。总生存时间定义为自手术开始直至死亡或最后一次随访（复发前）。比较两组3年总生存情况。

1.4 统计学方法

计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验;计数资料采用χ2检验。LncRNA TINCR表达对术后生存的预测作用采用ROC曲线分析。Kaplan-Meier法绘制患者无瘤生存情况曲线，采用Log-rank法分析。所有统计均由MEDCALC 15.2软件完成，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HCC组织LncRNA TINCR表达水平对术后生存的预测价值

将HCC组织LncRNA TINCR表达水平与术后复发情况（无复发=0，复发=1）绘制ROC曲线（图1），并计算得出曲线下面积（AUC）为0.812，特异度为73.77%，灵敏度为79.17%，最佳判读值为1.89（P<0.0001）。

2.2 HCC组织LncRNA TINCR表达对术后长期生存的影响

将HCC组织LncRNA TINCR相对表达水平大于1.89（ROC曲线所得的最佳判读值）的93例（59.24%）患者纳入高表达组，而将LncRNA TINCR相对表达水平小于或等于1.89的64例（40.76%）患者纳入低表达组。两组患者的一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05）（表1）。高表达组术后3年内有76例患者死亡，3年总生存率为18.28%（17/93）;低表达组术后3年内有20例患者死亡，3年总生存率为68.75%（44/64）。Log-rank法分析生存曲线发现低表达组3年总生存率明显优于高表达组（P<0.0001，两组间死亡风险比为3.7534，95%可信区间为2.5158～5.6000）。见封三图1。

3 讨论

HCC目前仍是严重危害国民健康的重大公共卫生难题，全世界超过一半的新发HCC病例和死亡病例发生在我国[1]。虽然针对HCC的治疗有了长足的发展，但是根治手术仍是治疗HCC最理想的治愈措施之一[4]。由于在我国大部分HCC发现时已是中晚期，甚至已经侵犯胆道及门脉系统，因此术后复发率高，总体预后很不理想[5-6]。目前亟需进一步探究引起HCC術后复发易感因素和靶点，以改善HCC患者预后[12]。

新一代的基因测序技术已经发现超过90%的人类基因组转录产生一系列非蛋白编码（非编码）RNA（ncRNA）[13-14]。长链非编码RNA（LncRNA）大于200核苷酸长度，虽然不具有蛋白质编码功能，却能显著影响生物学过程[15]。与microRNA相比，LncRNA的功能及机制尚未完全被人类掌握。然而，近年来人们对LncRNA的研究越来越深入。目前已经证实LncRNA能调节多种细胞生理活动，包括染色质修饰、基因印记、选择性剪接、基因组重排、细胞增殖、迁移、凋亡及核质转运等[16]。研究表明，LncRNA参与了广泛的生理及病理生理过程，通过正反馈/负反馈通路在癌症发生发展中起到促癌或抑癌基因的作用[17]。也有证据显示，LncRNA与肿瘤细胞增殖、凋亡、转移和侵袭有关[18-19]。因此，LncRNA有望成为肿瘤诊断标志物及潜在的治疗的靶点。

终末分化诱导非编码RNA（Terminal differentiation -induced lncRNA，TINCR）是從人类分化的体细胞中分离得到的一个长3.7 kb的LncRNA转录本[20]。研究发现TINCR在肝细胞癌、结直肠癌、胃癌、鳞状细胞癌、膀胱癌、乳腺癌和黑色素瘤等表达异常，TINCR与多种分子相互作用而影响基因转录及转录后过程，可加速肿瘤发展[8-11，21]。

近年来，关于LncRNA TINCR 在肝癌发生发展中的作用机制研究日渐受到重视。有学者利用蛋白组学对携有丙肝病毒的肝癌患者的肝癌组织进行检测，结果发现在此类肝癌组织中LncRNA TINCR的表达较正常肝组织增高[22]。有学者将HCC组织中的LncRNA TINCR的表达水平与肿瘤大小、TNM分期及血管浸润进行相关性分析，结果提示两者相关性紧密，而进一步的生存分析发现，高表达的患者术后无瘤生存率略低于表达患者，从而推测LncRNA TINCR表达升高能增加肿瘤侵袭性，并能促进HCC术后进展[10]。

本研究结果显示，HCC组织LncRNA TINCR表达水平对术后生存预测的曲线下面积（AUC）为0.812，特异度为73.77%，灵敏度为79.17%，最佳判读值为1.89（P<0.0001）。通过此结果，将患者分为LncRNA TINCR高表达组和LncRNA TINCR低表达组，Log-rank法分析生存曲线发现低表达组3年总生存率明显优于高表达组（P<0.0001）。

已有研究显示，LncRNA TINCR能作为竞争性地结合microRNA（Competing endogenous RNA，ceRNA）调控基因表达，其不但可活化某些蛋白编码基因的表达，亦可以抑制蛋白编码基因的表达[23-25]。目前已经证实，LncRNA TINCR能通过竞争性结合miR-375，从而下调miR-375表达，起到促进肿瘤进展的作用，而大量研究表明miR-375在肝癌中发挥抑制肿瘤的功能[26-27]。因此，可以推测通过降低LncRNA TINCR水平能增加miR-375表达，从而抑制HCC进展，能显著改善HCC预后。

综上所述，肝癌组织LncRNA TINCR表达水平与肝癌预后显著相关，LncRNA TINCR表达水平升高则预示着预后不佳，因此LncRNA TINCR可能是改善肝癌术后长期生存的有效治疗靶点。

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（收稿日期：2019-09-17）