强直性脊柱炎患者HLA-B27基因分型及临床特征分析

2020-12-15 08:30岳德波姜永玮徐英春
中日友好医院学报 2020年5期
关键词:葡萄膜亚型分型

刘 倩,马 亮,岳德波,刘 辉,姜永玮,徐英春

(1.中国医学科学院 北京协和医学院 北京协和医院 检验科,北京 100730;2.中日友好医院 检验科,北京100029;3.中日友好医院 骨科,北京 100029)

强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)是一种慢性进展的自身免疫性炎症疾病,以中轴关节慢性炎症为主,主要侵犯骶髂关节、脊柱骨突、脊柱旁软组织,同时伴发下肢大关节等外周关节以及关节外表现,如前葡萄膜炎、溃疡性结肠炎、肺纤维化等,严重者可发生脊柱畸形和强直[1]。我国AS 患病率在0.2%~0.3%,约有400~500 万的AS 患者。AS 发病隐匿,早期骶髂关节炎影像学病变程度通常达不到诊断标准[2],临床表现也并非特异性,极易造成误诊,严重影响患者的治疗、预后以及生活质量。目前,AS 病因尚不明确。有多项研究表明,其发病机制与遗传、免疫、环境等密切相关[3,4]。90%的AS 患者人类白细胞抗原B27(HLA-B27) 基因检测为阳性,正常人群中只有4%~7%左右,HLA-B27 与AS 发病密切相关[5]。本研究分析AS 患者HLA-B27 基因分型特点及相关临床特征,以期为临床诊疗提供指导及依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象

纳入2018年1月~2019年12月中日友好医院骨科、风湿免疫科等确诊的287例AS 患者,其中男225例、女62例;就诊年龄8~83 岁,中位年龄36 岁。AS 纳入标准: 符合美国风湿病协会(American Rheumatology Association,ARA)1984年修订的纽约标准,且具备临床资料及影像学检查。排除标准:有其他自身免疫性疾病患者;合并感染性疾病患者; 合并恶性肿瘤等消耗性疾病患者;孕期及哺乳期女性。以上所有患者或其监护人均签署知情同意书。

1.2 研究方法

收集及记录287例AS 患者的基本资料 (性别、就诊年龄、发病年龄、平均病程、有无AS 家族史、有无葡萄膜炎);清晨采集患者空腹状态下静脉血2ml,乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝,采集后立即混匀,用于外周血核酸的制备提取。

1.3 检测方法

核酸制备提取: 采用天隆科技公司Ex-DNA全血提取试剂盒,按照说明书要求与步骤提取核酸,并采用Nanodrop1000 微量分光光度计测定每份核酸的浓度和纯度。

HLA-B27 基因分型检测:采用天津市秀鹏生物技术开发有限公司HLA-B27 基因分型测定试剂盒对上述核酸进行基因分型检测。PCR 循环参数:96℃2min;96℃20s,68℃1min,循 环5 次96℃20s,65℃50s,72℃45s,循 环10 次;96℃20s,62℃50s,72℃45s,循环15 次;72℃2min;ABI7500 荧光定量PCR 分析仪进行熔解曲线分析,得出HLA-B27 基因分型结果。

1.4 统计学方法

采用SPSS22.0 软件对数据进行统计学分析。计量资料以χ-±s 表示,组间比较采用t 检验;计数资料以率表示,组间比较采用卡方检验。

2 结果

2.1 AS 患者的临床特征

287例AS 患者,男225例,女62例,男女比例约为3.6:1;就诊年龄8~83 岁,发病年龄(27.3±12.4)岁,病程(11.7±9.8)年;HLA-B27 基因阳性238例 (82.9% ),HLA-B27基因阴性49例(17.1%);AS 家族史患者共46例(16.0%),其中一级亲属41例(14.3%),二级亲属5例(1.7%);伴发葡萄膜炎的AS 患者共29例(10.1%)。

表1 示,男性AS 患者就诊年龄、发病年龄明显早于女性AS 患者,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),HLA-B27 基因阳性比例、病程、AS 家族史、伴发葡萄膜炎两组比较差异无统计学意义(均P>0.05)。

2.2 HLA-B27 基因阳性与阴性AS 患者的特征

表2 示,HLA-B27 基因阳性AS 患者发病年龄明显早于HLA-B27 基因阴性AS 患者,差异有统计学意义(P<0.05);性别构成比、就诊年龄、病程、AS 家族史、 伴发葡萄膜炎两组比较差异均无统计学意义(均P>0.05),但是HLA-B27 基因阳性患者AS 家族史、 伴发葡萄膜炎比例高于阴性组。

2.3 HLA-B2704 亚型、HLA-B2705 亚 型AS 患者的比较

238例HLA-B27 基因阳性AS 患者进一步基因分型检 测,HLA-B2704 型131例 (55.0%),HLA-B2705 型101例 (42.4%),HLA-B2702 型2例(0.8%);HLA-B2704*HLA-B2705 复合杂合子3例 (1.3%),HLA-B2705*HLA-B2708 复合杂合子1例 (0.4%)。表3 示,HLA-B2704 和HLAB2705 亚型组AS 患者伴发葡萄膜炎的差异有统计学意义(P<0.05),就诊年龄、发病年龄、病程、AS家族史两组间差异均无统计学意义(均P>0.05)。

表1 男性和女性AS 患者基本特征比较

表2 HLA-B27 基因阳性、阴性AS 患者的比较

表3 HLA-B2704、HLA-B2705 亚型AS 患者的比较

3 讨论

自1973年Brewerton 和Schlosstein 首次报道HLA -B27 与AS 相关,HLA-B27是目前已知与AS 关联最强的基因。因此,分析和研究HLA -B27 基因亚型分布及其相关临床特征,对于AS 早期诊断及预后有很大意义。

3.1 AS 患者临床特征分析

本组研究中,男女AS 患者比例约为3.6:1,男性占比78.4%(225/287),男性患者就诊年龄、发病年龄均显著早于女性患者。很多早期AS 文献报道男女比例可达7~10:1,原因可能与纳入研究的患者的民族和人种有关,据我们目前的资料和相关研究发现,造成此差异更重要的原因在于女性患者病情相对较轻,起病较为隐匿,炎性腰背痛等症状往往不明显,导致女性确诊AS 比男性更有难度,误诊率、延误率较高。本研究中患者平均发病年龄(27.3±12.4)岁,与国内其余文献报道及队列研究相符合[6];有AS 家族史患者占16%,其中一级亲属占比重更大; 在2015年的一项Meta 分析中,约有25.8%的AS 患者伴发葡萄膜炎[7],在本次研究中葡萄膜炎发生率为10.1%,与国内冀肖健[6]研究结果相符,葡萄膜炎发生率与纳入研究的患者HLA-B27 基因亚型相关。

3.2 HLA-B27 基因阳性与阴性AS 患者基本特征比较

HLA-B27 位于人类第6 号染色体短臂上,包含8 个外显子和7 个内含子,存在多个等位基因,各亚型具备不同的流行病学特征以及与疾病的关系,且在不同国家、不同种族中HLA-B27 各亚型频率也不尽相同[8]。国外一项单中心研究AS 患者疾病特征的回顾性分析[9]中发现HLA-B27 阳性率为79%,与本研究中AS 患者HLA-B27 基因阳性率82.9%(238/287) 相符。HLA-B27 基因阳性AS 患者发病年龄显著早于HLA-B27 基因阴性AS 患者(P<0.05),HLA-B27 基因阳性患者AS 家族史比例高于阴性组,伴发葡萄膜炎比例为阴性组3 倍左右,虽然后两项指标的差异无统计学意义,也提示我们HLA-B27 基因阳性AS 患者较阴性患者发病更早、临床症状更复杂。

3.3 HLA-B2704、HLA-B2705 亚型AS 患者伴发葡萄膜炎的比较

有研究表明,HLA-B2705 亚型几乎见于所有人种,HLA-B2704 亚型主要见于中国汉族人群,并且为优势亚型[10],HLA-B2706 亚型和HLAB2709 亚型为保护性亚型。本研究中HLA-B2704亚 型55.0%(131/238),HLA-B2705 亚 型42.4%(101/238),罕见型别HLA-B2702 型检出2例,HLA-B2704*HLA-B2705 复合杂合子3例,HLAB2705*HLA-B2708 复合杂合子1例,与国内外相关研究基本相符,因样本量偏小,基本特征等暂时无法进行统计学分析比较。

葡萄膜炎是AS 患者最易伴发的关节外表现,病情复发频繁,大量文献都曾证实HLA-B27基因与葡萄膜炎有很强的相关性,我们的数据也证实了HLA-B27 基因阳性AS 患者伴发葡萄膜炎比例高于阴性组患者。另外,我们在HLA-B27基因亚型分析中发现HLA-B2705 亚型AS 患者更易伴发葡萄膜炎。

本研究尚存在一些不足,例如复合杂合子样本量偏小,未进一步对基因亚型与临床特征进行相关性分析,待后续研究继续扩大样本量。本研究表明,对AS 患者在进行HLA-B27 基因检测的基础上,更应该在亚型水平上进一步分型,对疾病的诊断、关节外病变的早期防治有更大的价值。

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