中药材木莲皮(柴厚朴)的薄层色谱鉴别方法考察

熊 敏，杨 鑫，吴兰云

(贵州省黔东南州食品药品检验检测中心，贵州 黔东南州 556000)

本品为木兰科植物桂南木莲ManglietiachingiiDandy的干燥树皮。木兰科(Magnoliaceae)植物是被子植物中最原始的类群之一，全球共有 18属335种大部分为乔木或灌木凹。其中我国自然分布的有14属约165种，广泛分布于18°30′～41°20′N，95°40′～126°30′E之间的22个省(区)，种类之多分布之广均居世界各国之首。全世界约40种分布于亚洲东南部的热带和亚热带地区，为亚洲的特有属。我国约产28种，占全属总种数的70% ，自然分布于长江流域以南的南部和西南部地区海拔为800 ～2000 m的山谷和山坡中下部空气湿度较大土壤湿润、深厚、肥沃、pH值为5.5～ 7.0的红黄壤杂木林中。

木莲属(ManglietiaBlume)发表于1823年，是木兰科中最为原始的类群[1]，分布于亚洲热带和亚热带，以亚热带为主。该属除落叶木莲(ManglietiadeciduaQYZheng)[2]为落叶乔木外，其余皆为常绿乔木。在木莲属植物中，各种类之间很多性状非常接近，有些种类不凭借花和果的性状很难区分。而在木兰科分类中，木莲属与木兰属的系统学关系一直是争论的焦点，Canright[3]、Keng[4]、Nooteboom[5]等认为应该将木莲属并入木兰属，但也有不少证据支持木莲属单独成属。

中药大辞典转载《江苏天目山植物志》，本品木莲果实(或根皮、树皮)具有通便、止咳的功用，主治实火便秘和老年干咳[6]。木莲皮，又名柴厚朴，为木兰科木莲属植物桂南木莲ManglietiachingiiDandy的干燥树皮。广西民间有代厚朴供药用的历史，称之为“山厚朴”、“土厚朴”[7]。《中华本草2》中记载的柴厚朴为木兰科植物四川木莲的树皮[8]。夏初剥取树皮、发汗至内表面呈棕褐色或黄褐色时，取出(根皮或枝皮直接干燥)，蒸透、干燥。具有止咳，通便的功效。用于实火便秘，老年干咳[9]。原标准无薄层鉴别项，根据文献调研木莲皮所含成分为厚朴酚，故以厚朴酚作为对照品按《中国药典2015年版》(一部)厚朴项下的薄层鉴别对其进行薄层鉴别。按照国家药典委员会《中药分析方法验证指导原则实施细则》的相关要求进行以下方法学耐用性考察。

1 仪器和材料

仪器：1)卡玛LINOMATAT5半自动点样器：2)KQ - 500DA型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

薄层板：1)青岛海洋化工厂分厂硅胶H板(批号20160208)；2)青岛海洋化工厂分厂硅胶G板(批号20160208)；3)天津思利达科技有限公司硅胶GF254板(批号：130515)；4)天津思利达硅胶GF254板(批号20160208)；5)青岛胜海精细化工有限公司硅胶GF254(批号：20181112)。

试剂：甲苯、甲醇均为分析纯。

药材：所有实验样品均由本中心课题组采样组的人采集。样本来自于贵州不同地区野外采集的3个药材样品，见表1。

表1 供试品来源表Tab.1 Sources of test samples

2 方法

2.1 供试品溶液的制备

取木莲皮粉末1 g，加石油醚(60～90℃)20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1 mL使溶解，作为供试品。

2.2 对照品的制备

原标准无薄层鉴别项，根据文献调研木莲皮所含成分为厚朴分，故以厚朴酚作为对照品，取厚朴酚对照品适量，加乙醇配制成1 mg/ml的对照品溶液。

2.3 木莲皮不同薄层板的考察

薄层色谱鉴别按照《中国药典2015年版》(一部)厚朴项下的薄层鉴别对其进行薄层鉴别，分别吸取榕江县平阳镇木莲皮、厚朴酚对照、榕江县平阳镇木莲皮溶液各5 μL，分别点于3个不同厂家薄层板上，温度：10℃，湿度：82%，以甲苯∶甲醇(17∶1)为展开剂，展开、取出、晾干，置紫外光(254 nm)下检视，见图1青岛海洋化工厂分厂硅胶H板(批号20160208)；见图2青岛海洋化工厂分厂硅胶G板(批号20160208)；见图3天津思利达科技有限公司硅胶GF254板(批号：130515)。进行了硅胶G板、硅胶GF254板、硅胶H板的考察，结果硅胶GF254较好。

图1 青岛海洋H板Fig.1 Qingdao Ocean H Plate

图2 青岛海洋G板 图3 天津思利达GF254Fig.2 Qingdao Ocean G Plate Fig.3 Tianjin Silida GF254

2.4 展开系统的优选

根据木莲皮的化学成分研究，且为了获得最佳的展开效果，试验了多种展开系统： A石油醚(60～90℃)∶丙酮∶乙酸乙酯(12∶1∶3)、B石油醚(60～90℃)∶环己烷∶丙酮∶乙酸乙酯(6∶6∶1∶3)、C石油醚(60～90℃)∶环己烷∶丙酮∶乙酸乙酯(4∶8∶1∶3)、D石油醚(60～90℃)∶环己烷∶丙酮∶乙酸丁酯(3∶9∶1∶2)、E甲苯∶甲醇(17∶1)。按照2015版<《中国药典》四部通则0502薄层色谱法进行试验，分别吸取榕江县平阳镇木莲皮、厚朴酚对照、榕江县平阳镇木莲皮溶液各5 μL，点于天津思利达科技有限公司硅胶GF254板(批号：130515)上，在温度：10℃，湿度：82%，分别以A、B、C、D、E展开系统为展开剂，展开、取出、晾干。置紫外光(254nm)下检视。结合试验结果，最终确定展开系统为E：甲苯∶甲醇(17∶1)为展开剂 ， 在此条件下色谱图斑点清晰、分离度较好、Rf重复性好。详见图4-图8。

2.5 不同提取溶剂考察

按照2015版《中国药典》四部通则0502薄层色谱法进行试验，称取3份木莲皮粉末各1 g，分别甲醇超声30 min、乙醇超声30 min、石油醚(60～90℃)超声30 min，在温度7℃，湿度90%，以甲苯∶甲醇(17∶1)为展开剂，分别点于硅胶GF254板(天津思利达科技有限公司硅胶GF254板(批号：130515))上，展开、取出、晾干，在紫外灯254nm条件下观察，结果见图9(1.甲醇超声30 min；2.厚朴酚对照品；3.乙醇超声30 min；4.石油醚(60～90℃)超声30 min)，结果甲醇、乙醇提取的供试品，展开后除三个主斑点外，原点残留杂质较多，主斑点与原点之间有未分离的杂质带，而石油醚(60～90℃)提取的供试品只有三个主斑点，原点和其他位置未见明显的杂质，建议以石油醚(60～90℃)超声提取列为正文。

图4 展开剂A 图5 展开剂BFig.4 Developer A Fig.5 Developer B

图6 展开剂C 图7 展开剂DFig.6 Developer C Fig.7 Developer D

图8 展开剂E图9 不同提取溶剂考察 Fig.8 Developer E Fig.9 Investigation ofdifferent extraction solvents

2.6 不同温湿度的考察

按照2015版<《中国药典》四部通则0502薄层色谱法进行试验，称取榕江县平阳镇木莲皮粉末1 g，以甲苯∶甲醇(17∶1)提取，分别吸取榕江县平阳镇木莲皮、厚朴酚对照、榕江县平阳镇木莲皮溶液各5 μL，分别点于同一硅胶GF254板(天津思利达科技有限公司硅胶GF254板(批号130515))上，在紫外灯254 nm条件下观察，结果a：低温5℃与较低湿32%条件下，供试品分离度较好，见图10；b：中温20℃与较高湿58%条件下，供试品分离度较好，见图11；c：高温40℃与低湿32%条件下，供试品分离度较好，见图12；d：高温40℃与高湿88%条件下，供试品分离度较好，见图13。

图10 a温湿度 图11 b温湿度Fig.10 Temperature and Fig.11 Temperature and humidity a humidity b

图12 c温湿度 图13 d温湿度Fig.12 Temperature and Fig.13 Temperature and humidity c humidity d

2.7 不同生产厂家薄层硅胶GF254的考察

按照2015版<《中国药典》四部通则0502薄层色谱法进行试验，分别称取雷山永乐、都匀三都和榕江平阳木莲皮粉末各1 g，用甲苯：甲醇(17∶1)提取，在温度9℃，湿度90%条件下，分别吸取雷山永乐、厚朴酚对照品、都匀三都和榕江平阳木莲皮点于天津思利达硅胶GF254板(批号20160208)上，结果斑点清晰，见图14；点于青岛胜海精细化工有限公司硅胶GF254板(批号：20181112)上，结果斑点清晰，见图15；点于青岛海洋化工胶GF254板(批号20160208)上，结果斑点清晰，见图16。

图14 天津思利达 Fig.14 Tianjin Silida

图15 青岛胜海 图16 青岛海洋Fig.15 Qingdao Shenghai Fig.16 Qingdao Ocean

3 结果

1)进行了3种薄层板的考察，结果硅胶GF254较好；

2)进行了5种不同展开剂的考察，最终确定E：甲苯∶甲醇(17∶1)为展开剂 ， 在此条件下色谱图斑点清晰、分离度较好、Rf重复性好；

3)对3种提取方法进行考察，在得到的薄层色谱信息相同情况下，选择简单、方便及快速的超声提取法；

4)分别以3种溶剂进行考察，结果石油醚(60～90℃)提取的供试品只有三个主斑点，原点和其他位置未见明显的杂质，建议以石油醚(60～90℃)超声提取列为正文；

5)分别以4种温湿度进行考察，结果供试品分离度都较好；

6)分别用天津思利达硅胶GF254板(批号20160208)、青岛胜海精细化工有限公司硅胶GF254板(批号：20181112)、青岛海洋化工胶GF254板(批号20160208)，结果斑点清晰度均较好。