非洲绿猴和食蟹猴主要肠道细菌的实时定量PCR检测及分析∗

周小军 尚艳姣 王 进 王 爽 邱业峰

(军事科学院军事医学研究院实验动物中心,北京 100071)

人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染会导致获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS),具有极高的病死率[1],AIDS的发病机制尚未完全阐明。猴免疫缺陷病毒(sim ian immunodeficiency virus,SIV)与HIV密切同源,SIV天然宿主包括乌白眉猴、非洲绿猴、山魈[2-3]等,研究天然宿主对SIV感染的适应性机制,有助于 AIDS致病机制研究、降低HIV的母婴传播、指导HIV疫苗开发,以及改善对 HIV感染者的长期治疗。

肠道菌群与人体健康密切相关,肠道菌群参与人类的许多生L过程,如宿主代谢、自身免疫和过敏、大脑发育与神经交互等[4-6],此外肠道菌群组成差异还与HIV感染的预防和干预以及抗PD1肿瘤治疗等有效性相关[7-8]。最近一项研究显示,非洲绿猴在SIV感染早期会快速激活并维持其粘膜组织中的再生性伤口愈合机制,提示肠道屏障完整性可能在其对SIV感染适应性中发挥重要作用[9]。本研究拟对非洲绿猴和食蟹猴肠道细菌的相对含量进行比较研究,以明确非洲绿猴肠道菌群特征及其在SIV感染适应过程中的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物

本中心饲养健康成年非洲绿猴和食蟹猴各12只,排除肥胖个体,普通级,5～8岁[SCXK(军)2012-0019]。每日饲喂全价营养颗粒料,辅以清洁水果,自由饮水。

1.2 方法

1.2.1 粪便样本采集:每只动物收集其新鲜粪便样本,按每份 200 mg等分后进行液氮速冻,转运至-80℃冰箱保存。

1.2.2 粪便样本 DNA提取:采用 QIAamp PowerFecal DNA Kit进行粪便样本 DNA提取,-80℃冰箱保存。

1.2.3 粪便样本DNA实时定量PCR分析:采用实时定量PCR体系(20μL)包括 10μL SYBR Green Realtime PCR Master Mix,300 nmol/L正反向引物,300 ng粪便样本DNA,其余用ddH2O补足。……