一种利用荧光酶标仪快速确立药动学参数的方法

李知宗，刘惊涛，陈恒玲，林显光

(中南民族大学 生物医学工程学院/脑认知国家民委重点实验室/医学信息分析及肿瘤诊疗湖北省重点实验室，湖北 武汉 430074)

1 引言

近年来，多肽类药物在各类疾病中得到了快速发展。为了更加准确地掌握药物在体内的吸收、代谢规律，就需要对其药代动力学进行研究。目前，对药动学参数的研究大多采取HPLC、LC-MS，成本较高[1]。因此，本文利用荧光酶标仪，对肽类药物药动学参数的确立进行改良，为后续研究提供理论基础。

2 实验材料与仪器

2.1 实验动物

雄性SD大鼠，SPF级，体重180～200 g，购买于湖北省疾病预防控制中心。饲养于12h光照/12h黑暗的环境中，自由摄食饮水。动物实验与处理均遵照《中南民族大学实验动物使用与福利指导手册》。

2.2 实验试剂与仪器设备

实验试剂如表1所示，主要仪器设备如表2所示。

表1 主要实验试剂

表2 主要仪器设备

3 实验方法

3.1 溶液的配制

(1)0.9%的生理盐水：称取4.5 g 氯化钠溶于500 mL超纯水中，灭菌后分装。

(2)20%的溶液：称量8 g 溶于40 mL的生理盐水中，备用。

(3)荧光标记肽COX52-69按每管2 mg分装，避光环境下，每管溶于0.85 mL生理盐水中，冻存于-20 ℃备用。

3.2 设立阳性对照

实验前将大鼠断粮12～16 h，饮水不限。将大鼠固定于实验动物固定器中图1(a)，鼠尾暴露于笼外。用橡皮筋或缝合线捆扎鼠尾根部，置于40 ℃热水中5～10 s，使鼠尾静脉充盈肿胀，易于显现静脉。右手持针，尽量使进针处血管与针头方向平行，针头平行于鼠尾刺破表皮图1(b)，若可见回血，则左手捏住鼠尾，右手推拉注射器活塞，制造负压，抽取1.5 mL血液[2]。……