鸭源魏氏梭菌病的诊断与治疗

马芹，翁立雪，许明清，汪建华，赵杰，石艳红，梁之策，张秀美

鸭源魏氏梭菌病的诊断与治疗

马芹1，翁立雪2，许明清1，汪建华1，赵杰1，石艳红1，梁之策1，张秀美3*

（1.山东和康源生物育种股份有限公司，山东 济南 250101；2.山东省烟台市福山区畜牧兽医站，山东 烟台；3.山东省农业科学院畜牧兽医研究所，山东 济南）

为建立鸭源魏氏梭菌病的诊断与治疗方法，对临床32周龄樱桃谷种鸭肠道臌气病例展开研究。结果为剖检可见肠道臌气、肠黏膜覆有黄色纤维素性假膜，实验室分离到革兰氏阳性粗短杆菌，经PCR扩增及测序分析，鉴定为魏氏梭菌。同时在场区饲料中也检测到该菌，因此种鸭感染可能跟饲料污染有关。临床通过优化饲料配方、入场前饲料细菌检测，并对临床病鸭使用恩拉霉素后，死淘现象得以有效控制。

近两年种鸭感染魏氏梭菌病例较为普遍，临床上发生明显的降蛋，同时种鸭死淘率也较高。临床病料如鼓气的肠道、肝脏、饲料以及场内土壤中均能检测到魏氏梭菌，该菌水平传播能力较强。临床种鸭多因吞食污染的饲料而感染魏氏梭菌，引起肠道扩张、充满大量气体，肠黏膜的脱落及肠壁变薄，该病典型的症状为肠道臌气、黄色纤维素性假膜[1-3]。国内外关于樱桃谷种鸭感染魏氏梭菌的报道较少。本文从临床诊断、病理剖检及实验室检测等方面展开，建立科学有效的诊断和治疗方法，对临床防控具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 方法

1.1.1 病料 山东聊城某种鸭场32周龄樱桃谷鸭。

1.1.2 主要试剂 厌氧肉肝汤培养基，购自青岛海博生物技术有限公司；血琼脂平板，购自北京陆桥技术股份有限公司；PCR反应试剂盒，购自南京诺唯赞生物科技有限公司；革兰染色试剂盒，购自珠海贝索生物技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 临床观察与剖检 发病的种鸭表现为饮食、饮水下降，不喜走动、腹泻，日均死亡30只左右，产蛋下降。将病死鸭羽毛消毒打湿后，置于解剖台进行剖检，观察肠道及其他组织脏器的病变情况。剪开小肠的中后段，观察肠内容物与肠壁的厚薄程度，刮除肠内容物后制作肠抹片，进行固定、染色、镜检。

1.2.2 细菌分离培养 在无菌工作台内，取肝脏划线接种于血琼脂平板，37 ℃ 厌氧环境，培养18~24 h。同时无菌剪取适量肝脏组织，置于厌氧肉肝汤培养基内，沸水煮沸10 min，然后置于37 ℃ 温箱内培养18~24 h，观察细菌生长情况。

1.2.3 PCR分析 取适量菌液进行PCR扩增，上游引物为AGAGTTTGATCMTGGCTCAG，下游引物为TACGGYTACCTTGTTACGACTT，扩增体系为Mix12.5 μl，上游引物1 μl，下游引物1 μl，细菌培养液2 μl，ddH2O 8.5 μl，反应程序为94 ℃ 5 min，95 ℃ 30 s，54 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min 30 s，72 ℃ 8 min，扩增结束后于凝胶成像系统下进行观察，连接转化并进行测序分析。

1.2.4 饲料检测 将适量养殖场区内饲喂的饲料置于厌氧肉肝汤内，沸水煮沸10 min，然后置于37 ℃温箱内培养18~24 h，观察有无气体产生，同时将培养液进行镜检，观察有无细菌生长，PCR扩增判断有无魏氏梭菌的污染。

2 结果

2.1 剖检结果

病死鸭腹腔剖开后，肠道表面呈污黑色，肠壁变薄扩张充气，肠黏膜上覆盖一层厚厚的黄色纤维素性假膜，易于剥离，部分肠道有麸皮样物质。肠抹片在镜下观察到革兰阳性粗、短杆菌，大小为1~1.5 μm × 3~5 μm，两端钝圆，散在或排状排列，形态和大小与魏氏梭菌相似。

2.2 细菌培养结果

经分离培养后，血琼脂平板上长出光滑、圆形、灰白色菌落，有明显的溶血现象；经厌氧肉肝汤培养后，试管内培养液浑浊，并有较多的气泡产生。取单一菌落和适量培养液进行镜检，均观察到革兰阳性短粗杆菌，与肠抹片镜检结果一致。

2.3 PCR鉴定结果

细菌培养液经PCR扩增后，观察到1 500 bp左右单一片段，与预期扩增目的条带一致，经测序比对分析该菌为魏氏梭菌。

2.4 饲料检测结果

饲料在厌氧肉肝汤内培养24 h后，观察到明显的气泡。抽取适量培养液进行革兰染色，镜下观察到与肝脏分离菌形态一致，饲料中该菌含量更多，PCR扩增及测序分析为魏氏梭菌。

3 讨论

樱桃谷种鸭感染魏氏梭菌后，剖检症状与鸡感染魏氏梭菌的病例相似[4-5]，出现了严重的肠道臌气，肠黏膜坏死脱落，这解释了临床种鸭为何食欲下降、腹泻，进而导致较高的死淘率。魏氏梭菌属于产气厌氧型菌，经厌氧培养后观察到有“汹涌发酵”现象[6-7]，镜检为革兰阳性粗短杆菌，再经PCR和测序分析确定病原，本实验为临床鸭源魏氏梭菌感染病例提供了诊断技术和方法。在临床上不仅要检测出病原、确定合适的治疗方法，还应分析疾病发生的原因，避免疾病的扩散及复发，所以寻找魏氏梭菌的来源非常重要。魏氏梭菌分布范围较为广泛，饲料、土壤、粪便和畜禽肠道内都适合该菌繁殖，所以饲料在入场前一定要进行细菌检测，避免污染的饲料进入场区。在养殖过程中也应注意饲料的合理存放，防潮防霉变；另外要注意突然更换饲料的成分、滥用抗生素、添加较多蛋白质含量较高的物质，易引起肠道菌群的失调，导致该病的发生。在养殖过程中，应根据不同阶段胃肠道对营养物质的需求进行优化调整。另一方面，球虫感染也常继发魏氏梭菌，因球虫感染后产生的黏液和包浆蛋白质是魏氏梭菌的最佳营养物质[8-9]，在日常养殖过程中也应注意球虫的检测与监控。本实验通过临床分析、病理剖检、细菌分离培养及分子生物学诊断等方法，确定病原为魏氏梭菌后，临床使用恩拉霉素药物进行治疗，使得疾病得到了有效的控制。为防止该病的发生，还应加强饲养管理，及时清理粪便、更换垫料，做好日常消毒工作，避免应激刺激[10]，控制好适宜的温度与通风。

4 结论

综合临床表现、剖检观察、实验室分离培养及分子生物学鉴定分析，确定该菌为魏氏梭菌。因该菌感染后引发了较高的死淘率，临床采取紧急用药，使用恩拉霉素7d后，死淘得到了有效控制。又因饲料中也检测到该菌，及时优化饲料配方，饲料入场前进行细菌检测，合格后用于饲喂。同时加强场区内粪便的及时处理、消毒，提高饲养管理水平，种鸭现处于正常状态。

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（2021–01–15）

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1007-1733（2021）05-0029-02