SSR标记对部分茶品种的遗传多样性的初步分析

郑刘芳

茶树是我国重要的经济作物之一，我国具有悠久的茶树种植和利用历史，我国也是世界上最先发现和利用茶树的国家。作为一种多年生异花授粉植物，经过长期的自然选择，茶树具有丰富多样的遗传特性。SSR标记技术具有数量多、共显性、多态性好、引物通用性高、重复性好、操作程序简单等优点。目前在多种植物的研究上，SSR标记技术已被广泛应用。本次利用SSR标记技术和4300 DNA分析系统，更快速，准确地完成了实验。

一、材料和方法

1.1材料

23个茶树品种，包括10个安徽黄山茶区的，3个安徽江南丘陵茶区的，5个安徽大别山茶区的，3个福建地区的、1个云南地区的和1个日本数蓓种，取这23个茶树品种的一芽二叶新梢，将采集的样品储藏于-80℃冰箱，备用。

1.2方法

1.2.1DNA的提取与SSR引物合成 采用改良的CTAB法提取DNA，凝胶电泳法观察DNA的完整度，根据4300 DNA分析系统的检测原理，进行PCR扩增，通过4300 DNA分析系统进行成像检测。

1.2.2 23个茶树品种的遗传多样性分析

（1）基于4300 DNA 分析系统的SSR-PCR扩增

首先以23个茶树样品的等量混合液为模板、10μl初始体系对gSSR引物进行PCR扩增， 电泳后有扩增条带的，再以优化的体系对混合模板进行PCR扩增;再分别扩增所有23个样品，电泳后统计实验结果。

根据4300DNA分析系统使用手册，优化后的PCR扩增体系：1.0 μl DNA（25 ng·μl-1），0.2 μlM13F-F、0.2 μl R 和0.4 μl IR-M13F，0.8 μl dNTPs（25mmol·L-1），1.0 μl 10× Buffer （含Mg2+），0.1 μl Ex-Taq聚合酶（5U·μl-1），6.3 μl无菌水定容至10 μl。所有引物浓度均为1μmol·L-1。

然后均如下程序扩增：95℃预变性3 min;94℃变性45s，50～60℃（因引物而定）退火1.0 min ，72℃ 延伸45s， 10个循环;再进行 94℃变性30 s，51℃ 退火45s，72℃延伸30 s，25个循环;最后72℃延伸10min，4 ℃保存。

（2）变性聚丙烯酰胺凝胶比较与PCR产物电泳检测