CD90作为卵巢癌干细胞标志物的相关研究

翁艳洁 周晓水 王常玉 项 涛

卵巢癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，发生率仅次于子宫颈癌和子宫体癌而位居第 3 位，但病死率却位居各类妇科肿瘤的首位。化疗耐药、肿瘤复发及转移是卵巢癌预后不良的关键因素，肿瘤干细胞在其中起重要作用[1]。卵巢癌也被认为是肿瘤干细胞导致的疾病[2]。研究卵巢癌干细胞具有重要的科研价值和临床意义[3]。目前卵巢癌干细胞的识别和分离大多采用肿瘤干细胞标志物的方法，例如 CD44、CD133、CD117、CD24、ALDH1或 MyD88等，可能与肿瘤干细胞的异质性有关[4～8]。卵巢癌中CD90也可能是一种十分重要的肿瘤干细胞标志物[9]。笔者将对 CD90 是否可作为卵巢癌干细胞筛选的分子靶标进行分析，研究 CD90+卵巢癌细胞是否具有肿瘤干细胞的干性特征。

材料与方法

1.细胞培养：人卵巢癌顺铂耐药细胞 SKOV3-MD3 的制备：向5～6周龄雌性裸鼠腿部注射 SKOV3 细胞1×106/100μl，7天后腹腔注射3mg/kg的顺铂(美国Sigma公司)，每3天1次，共治疗8次后处死小鼠，取出瘤块，消化成单细胞再次打入其他小鼠腿部，重复上述实验 2 次，得到 SKOV3-MD3 顺铂耐药株。

人卵巢癌细胞株 SKOV3 购自美国标准生物品收藏中心(ATCC)。SKOV3及SKOV3-MD3以含10% (质量分数)胎牛血清的 RPMI 1640 培养基(美国Gibco公司)于5%CO2、37℃、95% 湿度条件下孵箱中常规贴壁培养，3～4天传代1次。

CD90+卵巢癌细胞用无血清的 DMEM/F12(1∶1)(美国Gibco公司) 培养，其中添加20ng/ml EGF(美国PeproTech公司)、10ng/ml bFGF(美国PeproTech公司)、5μg/ml 胰岛素(美国Sigma公司)、B27(1∶50)(美国Invitrogen 公司)、LIF 10ng/ml(美国Millipore公司)。

2.CD90+细胞和 CD90-细胞分选：收集贴壁培养的 SKOV3-MD 细胞，预冷 PBS 冲洗 2 次后加入 FITC 标记鼠抗人 CD90 抗体(美国BD公司)，37 ℃孵育1h。预冷PBS冲洗2次，采用BD FACSAria Ⅱ流式分选仪对CD90+和 CD90-细胞进行分选。……