高通量法测定血小板自身抗体的含量及临床意义

赵贇霄，左 斌，阮长耿, 何 杨

免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia，ITP)是一种以血小板减少为主要特征的出血性疾病。研究[1]表明，ITP患者体内可检测出针对多种血小板膜糖蛋白(glycoprotein, GP)的自身抗体，主要包括抗GPⅡb/Ⅲa和Ⅰb/Ⅸ自身抗体[2-3]。自身抗体与血小板结合后通过其Fc段被肝脾网状系统巨噬细胞识别吞噬，从而使血小板减少。有研究[4]表明不同自身抗体介导的血小板减少机制可能存在差异。抗GPⅠb自身抗体可通过Fc受体非依赖性机制使血小板减少。 因此，单一自身抗体的检测已无法满足ITP疾病的诊断和评估，需要同时鉴定多种自身抗体的特异性类型，以指导后续治疗。流式免疫微球芯片技术(flow cytometricimmuno-bead array, FCIBA)以聚苯乙烯微球为载体，并用荧光加以区分同一体系中的不同微球，从而实现高通量检测。

1 材料与方法

1.1 病例资料

1.1.1ITP组 选择2016年11月15日—2017年11月10日在苏州大学附属第一医院就诊患者共661例，其中男性249例、女性412例，年龄15～86(48.12±15.32)岁，血小板计数为(5～96)×109/L。ITP诊断依据美国血液学协会指南[5]。另跟踪调查地塞米松治疗前后患者75例，口服地塞米松40 mg/d，服用4 d。

1.1.2非免疫性血小板减少组(Non-ITP) 选择同期在苏州大学附属第一医院血液科就诊患者87例，其中男性39例、女性48例，年龄13～61(48.81±16.32)岁，血小板计数为(20～99)×109/L。包括再生障碍性贫血31例、急性淋巴细胞白血病18例、淋巴瘤17例、骨髓异常增生综合征21例。

1.1.3正常对照组 选择同期在苏州大学附属第一医院体检者158例，其中男性89例、女性69例，年龄21～57(33.41±9.93)岁，血小板计数为(121～287)×109/L。

1.2 方法

1.2.1外周静脉血采集与处理 分别采集各组外周静脉血2 ml，EDTA-K2抗凝；室温下1 000 r/min离心5 min，吸取上层富血小板血浆(platelet rich plasma, PRP)至1.5 ml离心管；……