沉默CTHRC1调控p53介导的线粒体凋亡诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

曾 健，蒋 斌，黄 果，陈 娟

乳腺癌是一种激素依赖性的高度异质性肿瘤，是女性癌症相关死亡的主要原因[1]，其早期极易漏检，而确诊时往往已是晚期，同时高度异质性使其预后较差[2]。胶原三螺旋重复蛋白1(collagen triple helix repeat containing-1，CTHRC1)是一种抑制胶原蛋白表达和增加细胞迁移的分泌蛋白，可参与肿瘤病理进程。研究[3]显示CTHRC1蛋白在乳腺癌组织高表达，并与乳腺癌不良预后相关；Lai et al[4]进一步表明CTHRC1可促进乳腺癌细胞增殖、侵袭与转移，并抑制凋亡，但并未阐明其具体分子机制。p53是一种抑癌基因，通过调控细胞生长、凋亡和DNA损伤修复等过程抑制肿瘤进程[5]。研究[6]表明CTHRC1可负调控p53表达，促进肝癌的进程。然而，沉默CTHRC1表达是否可通过上调p53表达而激活线粒体凋亡途径诱导乳腺癌细胞凋亡，目前尚未阐明。因此，该研究通过探讨CTHRC1沉默是否通过激活p53介导的线粒体凋亡途径诱导乳腺癌细胞凋亡，为临床靶向治疗乳腺癌提供更多理论基础。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和仪器人乳腺癌MCF-7细胞株购自北京中国医学科学院基础医学研究所；DMEM细胞培养基和胎牛血清购自美国Gibco公司；shRNA CTHRC1干扰质粒及其阴性对照质粒、siRNA p53干扰质粒及其阴性对照质粒均购自广州锐博生物科技公司；LipofectamineTM3000试剂购自美国ThermoFisher公司；CTHRC1及GAPDH引物均由上海生工生物公司合成；RT-PCR试剂盒购自上海全式金公司；CCK-8试剂盒、Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒、胞质和线粒体蛋白质提取试剂盒均购自上海碧云天生物技术有限公司；线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10)购自北京索莱宝科技有限公司；……