兔斯氏艾美耳球虫感染模型及巢式PCR诊断方法的建立

温福利

（联勤保障部队第九〇〇医院基础医学实验室，福州 350025）

兔球虫病（rabbit coccidiosis）是由兔球虫寄生于肠道或胆管引起的一种感染性寄生虫病[1]。兔球虫共有11种，其中斯氏艾美耳球虫（Eimeria stiedai，E.stiedai） 是唯一寄生于肝胆管上皮细胞的兔球虫，可导致严重的肝球虫病[2]。兔球虫病在临床中以肠型和肝型球虫混合感染为主，经过裂殖生殖和配子生殖的E.stiedai卵囊到肠腔后与肠型球虫一起随粪便排出[3]。巢式PCR是一种成熟的核酸扩增技术，通过内引物和外引物的双重基因扩增，可特异地鉴定是否存在E.stiedai感染。在科学实验中，因E.stiedai寄生部位的特殊性，较易获取纯种卵囊。本研究通过建立兔E.stiedai感染模型可获取更多卵囊，利用临床剖检、显微镜观察、血液生化检查和病理组织学检查等方法对建立的模型进行鉴定。

1 材料与方法

1.1 实验动物

普通级雄性新西兰兔9只，40～45日龄，平均体质量为0.84 kg，购自福建省连江玉华山自然生态农业试验场 [SCXK(闽)2014-0001]，有抗球虫药物治疗记录。实验兔饲养于联勤保障部队第九〇〇医院普通环境[SYXK(闽)2018-0005]，动物实验符合相关伦理要求并给予人道关怀。

1.2 主要仪器与试剂

Catalyst One 全自动生化分析仪为美国IDEXX Laboratories公司产品；EG1150H石蜡包埋机、RM2245半自动轮转式切片机、ST5020多功能染色机、CV5030全自动化玻片盖片机和DM2000生物显微镜均为德国Leica公司产品；ABI Veriti PCR仪为美国Applied Biosystems公司产品。植物基因组DNA快速抽提试剂盒和DNA扩增相关试剂为生工生物工程（上海）股份有限公司产品；PCR反应扩增仪为美国Bio-Rad公司产品；DYY-6C型稳压稳流电泳仪为北京六一生物科技有限公司产品；……