云南省不同地区烟草上TSWV NSs 氨基酸序列分析*

王景文 ，王偲博，陶宏征，高 雪，贾志强，王宇琪，李永忠，刘雅婷

(1.云南农业大学 农学与生物技术学院，云南 昆明 650201；2.云南农业大学 植物保护学院，云南 昆明 650201；3.云南农业大学 烟草学院，云南 昆明 650201)

烟草产业是云南省的支柱产业[1]。近年来，烟草上斑萎病毒严重，主要症状有叶片褪绿、皱缩、坏死斑和植株萎蔫等，导致局部烟区产量损失在60%以上[2-4]。

正番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt orthotospovirus，TSWV) 属于布尼亚病毒目(Bunyavirales)番茄斑萎病毒科(Tospoviridae)正番茄斑萎病毒属(Orthotospovirus)[5]，是侵染烟草的恶性病毒之一[6]。2011 年正番茄斑萎病毒被列为世界十大植物病毒之一，仅次于烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus，TMV)，位居世界第二[7]。TSWV 由三分体基因组结构组成，从小到大分别为S RNA、M RNA 和L RNA[8]。S RNA 正链编码非结构蛋白(nonstructural protein of RNA S，NSs)，互补链编码核壳体蛋白(nucleocapsid，NP)。其中NSs是TSWV 重要的致病因子[9]，既能够协助病毒复制、转录，还可以通过结合siRNA 和dsRNA抑制宿主RNA 沉默、增强其病毒症状[10-12]。目前，针对TSWV NSs 研究较少，本研究通过RTPCR、克隆、转化和测序技术，利用生物信息学软件对课题组前期采集的云南不同地区感染TSWV 的烟草样品与GenBank 公布的五大洲不同国家茄科作物上TSWV NSs 氨基酸序列进行分析；并且对云南不同地区烟草TSWV NSs 氨基酸序列进行选择压力分析，阐明来自不同地理分布的不同寄主上TSWV NSs 氨基酸序列间的遗传差异，为今后TSWV NSs 相关致病机制研究提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 研究材料

材料来自课题组前期从云南省玉溪市、昭通市、昆明市、红河州、曲靖市和楚雄州采集并且已经通过鉴定确定感染TSWV 的8 份烟草样品，采集到的烟草症状表现为叶片褪绿、局部坏死、叶片皱缩、坏死斑和植株萎蔫(图1)。……