应用Het-1A细胞系研究CDDO-Me对食管黏膜上皮屏障的保护作用

程凌雪，范永强，侯超，李文波

胃食管反流病（gastroesophaeal reflux disease，GERD）是消化系统常见的慢性疾病，严重影响患者的心理和生活质量。我国GERD发病率呈逐年上升趋势［1］。目前GERD的治疗以质子泵抑制剂（proton pump inhibitor，PPI）抑酸为主，但有高达30%的患者对PPI治疗反应欠佳［2］，寻求新的GERD防治策略很有必要。食管黏膜上皮屏障功能损害是GERD的重要发病机制［3］。当屏障功能受损时，细胞通透性增加并出现细胞间隙增宽，胃十二指肠内容物逆行弥散进入上皮层，损害食管黏膜，从而产生GERD的临床症状。研究发现，核因子E2相关因子2（nuclear factor E2-related factor 2，Nrf2）可调控食管黏膜上皮屏障功能，敲除小鼠Nrf2会降低其食管黏膜上皮的跨上皮电阻抗（transepithelial electrical impedance，TEER）和增加食管黏膜上皮的细胞间隙，故而小鼠出现食管黏膜上皮屏障功能下降［4］。2-氰基-3，12-二氧代齐墩果烷-1，9-二烯-28-酸甲酯（2-cyano-3，12-dioxooleana-1，9-dien-28-oic acid，CDDO-Me）是一种合成的齐墩果烷三萜类化合物，是有效的Nrf2激活剂，并可增强抗氧化反应［5］。CDDO-Me是否可通过激活Nrf2途径增强食管黏膜上皮的屏障功能，目前尚少见相关报道。本研究以Het-1A细胞系建立食管黏膜上皮屏障模型，观察CDDO-Me对食管黏膜屏障的保护效应，探讨CDDO-Me作为黏膜屏障增强剂的可行性。

1 材料与方法

1.1 细胞系、主要实验仪器及试剂Het-1A细胞（永生化人食管鳞状上皮细胞）购自美国组织培养库（ATCC）。倒置显微镜购自日本OLYMPUS公司；低速离心机购自德国Eppendorf公司；细胞电阻仪Millicell ERS-2购自美国Millipore公司；共培养小室、细胞培养皿、细胞培养瓶购自美国Corning公司；培养基BEBM、BEGM Single Quots购自瑞士LonzA公司；血清、L-15、Trypsin-EDTA购自美国Gibco公司；牛血清白蛋白（BSA）购自美国EQUITECH-BIO公司；CDDOMe、纤连蛋白（fibronectin）、牛Ⅰ型胶原蛋白（bovine collagen typeⅠ）购自美国Sigma公司。……