去泛素化酶抑制剂Au（PPh3）PT对胃癌细胞活力和凋亡的影响及机制

张培全 黄擎天 龙惠丹 李小芬

广州医科大学广东省蛋白质修饰与降解重点实验室（广州511436）

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和病死率分别为全球恶性肿瘤的第五位和第三位［1］。在我国胃癌患者总体5年生存率不足50%［2］，化疗作为晚期胃癌最常用的治疗手段之一［3-4］，发挥了重要作用，但存在许多不良反应［5-7］，迫切需要开发其他抗胃癌药物。Au（PPh3）PT 为实验室研发合成的一价金离子化合物，已被证实可以有效抑制多种去泛素化酶（deubiquitinase，DUB），是一种潜在的抗肿瘤药物［8］。本研究旨在探索Au（PPh3）PT 能否有效诱导胃癌细胞的毒性作用，为胃癌的治疗提供新的药物选择。

1 材料与方法

1.1 实验细胞人胃癌细胞系MGC-803 和SGC-7901 由广州医科大学附属肿瘤医院肿瘤研究所惠赠，均来源ATCC 细胞库。

1.2 实验药品与试剂RPMI-1640 培养基和胎牛血清购自Gibco；MTS 试剂盒购自Promega；抗caspase-3、抗caspase-8、抗caspase-9、抗cleaved caspase-8 及抗PARP 抗体购自Cell Signaling Technology；抗K48-、抗GAPDH、抗cleaved caspase-3 和抗cleaved caspase-9 抗体购于Bioworld Technology；Annexin V - fluoroisothiocyanate （FITC）/propidium iodide（PI）试剂盒购自江苏凯基生物技术股份有限公司；ECL 发光试剂盒、抗Ub 抗体、辣根酶标记山羊抗兔/抗鼠IgG 购自Santa Cruz；其他生化试剂为进口分装或国产分析纯。

1.3 实验仪器Varioskan Flash 酶标仪（美国Thermo 公司）；荧光倒置显微镜（德国ZEISS 公司）；HERA cell 150i 细胞培养箱（美国Thermo 公司）；Accuri C6 流式细胞仪（美国BD FACSAria 公司）；5810R 离心机（德国Eppendorf 公司）。

1.4 检测方法

1.4.1 细胞培养细胞用含10%胎牛血清的RPMI-1640 培养，置于37 ℃、5% CO2、饱和湿度的细胞培养箱中。

1.4.2 MTS 法测定细胞活力收集细胞，调为1 ×105个/mL 细胞悬液，每孔100 μL，接种到96 孔板，细胞培养24 h；弃掉旧培养液，加入新培养液（含1%的Au（PPh3）PT 药物溶液）100 μL，设DMSO 溶剂对照及空白对照组，分别作用24、48、72 h，加入20 μL MTS，避光培养2 ～4 h 后检测OD值，计算抑制率及IC50。……