甲状旁腺癌组织中CyclinD1、Menin蛋白表达与其临床病理特征的关系研究

秦靖宜 仝麟龙 王辉锋 李文奇 张俊杰

甲状旁腺癌是内分泌恶性肿瘤之一，少数患者可合并胰腺炎等症状[1-2]。由于甲状旁腺癌初期症状并无特异，因此早期甲状旁腺癌筛查主要通过血清指标及影像学检测来实现[3]。CyclinD1蛋白是细胞周期相关因子，可诱导G1期细胞增殖信号表达，并促使细胞周期从G1向S期转化；Menin蛋白是多发性内分泌腺瘤(multiple endocrine neoplasia type 1,MEN1)基因的表达产物，而MEN1是致癌基因的1种[4]。为观察甲状旁腺癌患者癌组织中的CyclinD1、Menin蛋白表达情况，并探讨其临床意义，本文选取60例甲状旁腺癌患者进行了如下实验,现报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2010年4月至2019年4月在我院接受手术治疗的甲状旁腺癌患者为研究对象。纳入标准：①年龄≥18周岁；②经病理检查确诊为甲状旁腺癌者；③无其他原发恶性肿瘤疾病者；排除标准：①临床资料不全者；②合并其他严重基础疾病。根据标准共纳入研究对象60例，男性35例，女性25例，年龄38～65岁，平均(50.13±4.28)岁，其中高分化者32例，中低分化者28例，淋巴结转移者18例，TNM分期Ⅰ+Ⅱ期22例，Ⅲ+Ⅳ期38例。对照组纳入排除标准：年龄≥18周岁，经病理诊断良性甲状旁腺肿瘤者，共纳入60例，男性33例，女性27例，年龄40～65岁，平均(50.15±4.32)岁。两组患者的一般资料比较无明显差别，具有可比性。本项研究经医院伦理委员会评审通过。

1.2 方法

采用免疫组织化法对两组患者病理组织样本进行CyclinD1、Menin蛋白表达水平检测，将两组样本进行包埋及4 μm切片后，置于60 ℃温箱内烘烤3 h，将切片样本进行脱蜡至水，并置于3%过氧化氢溶液内反应15 min，PBS洗涤一次，选用10 ml枸缘酸缓冲液浸泡5 min，微波炉修复抗原，PBS洗涤异常，滴入CyclinD1或Menin蛋白单克隆抗体进行一抗(浓度为1∶100)，将样本置于4 ℃温箱内反应12 h，取出后PBS洗涤2次，羊抗鼠IgG二抗，室温下进行反应25 min，取出后PBS洗涤2次，滴入5 ml链酶亲和素-过氧化物酶混合液反应30 min，PBS洗涤2次，DAB显色，苏木精复染，酒精梯度脱水，透明并封片，选用德国LaiKabx53荧光显微镜进行镜检。

1.3 评价指标

观察两组患者组织中CyclinD1、Menin蛋白表达情况，比较不同临床特征甲状旁腺癌患者CyclinD1、Menin蛋白表达的差异，分析影响甲状旁腺癌患者癌组织中CyclinD1、Menin蛋白表达的因素。阳性结果判定[5]：CyclinD1蛋白定位于细胞胞核，胞核内含棕黄色或棕褐色物质弥漫或颗粒状物质即为阳性细胞，切片中无阳性着色和阳性细胞数小于10%者为阴性，阳性细胞数在10%以上者为阳性。Menin蛋白染色阳性为棕黄色细小颗粒位于细胞核内。显色的细胞占全部细胞的25%或以上者为阳性，切片中癌细胞不显色或显色的细胞占全部细胞的25%以下者为阴性。

1.4 统计学处理

数据录入后，应用SPSS 11.5软件分析。计数和计量资料分别采用例和均数±标准差表示。两组患者和不同临床病理特征甲状旁腺癌患者CyclinD1、Menin蛋白表达情况的比较采用卡方检验进行分析，采用Logistic回归分析法分析影响甲状旁腺癌患者癌组织中CyclinD1、Menin蛋白表达的因素。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者组织中CyclinD1、Menin蛋白表达情况的比较

甲状旁腺癌患者组织中的CyclinD1蛋白阳性表达率高于良性甲状旁腺肿瘤组，Menin蛋白阳性表达率低于良性甲状腺肿瘤组患者(P<0.05)，见表1。

表1 两组患者组织中CyclinD1、Menin表达情况的比较(例，%)

2.2 不同临床特征甲状旁腺癌患者CyclinD1、Menin蛋白表达情况的比较

中低分化、有淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期的甲状旁腺癌患者的CyclinD1蛋白阳性表达率较高，Menin蛋白阳性表达率较低，不同年龄、性别患者的CyclinD1、Menin蛋白阳性表达率无明显差别，见表2。

2.3 影响甲状旁腺癌患者CyclinD1、Menin蛋白表达的因素分析

将单因素分析有意义的因素作为自变量，将CyclinD1、Menin蛋白表达率作为因变量，进行多因素Logistic回归分析，结果显示分化程度和TNM分期进入回归方程，其OR值分别为4.153和4.205。见表3。

表2 不同临床特征甲状旁腺癌患者CyclinD1、Menin蛋白表达情况比较/例

表3 影响甲状旁腺癌患者CyclinD1、Menin蛋白表达的因素分析

3 讨论

甲状旁腺癌发生、发展过程中均存在内在的分子机制，当前已知的与甲状旁腺癌发病相关的基因、蛋白以及信号路径有P53、CyclinD1以及Menin蛋白等[6]。其中CyclinD1蛋白是细胞周期蛋白的1种，其基因位于人11q13染色体，长约120 kb，具有295个氨基酸[7]。正常细胞在增殖情况下，上游生长因子可介导CyclinD1表达，并激活CDK4、CDK6，诱导CyclinD1与CDK4、CDK6相互结合，磷酸化视网膜母细胞瘤表达产物残基，最终诱导多种转录因子活化，促使细胞增殖[8]。正常增殖细胞内的CyclinD1表达水平较低，并且主要存在于上皮组织增殖带内，进入S期的细胞其内部CyclinD1可快速分解。CyclinD1可缩短细胞G1期，促其向S期变化，并导致细胞增殖失控，最终发展为肿瘤[9]。本组研究中，甲状旁腺癌患者组织中的CyclinD1蛋白阳性表达率高于良性甲状旁腺肿瘤组，提示CyclinD1蛋白过表达是甲状旁腺癌发生、发展的重要影响因素。大量研究显示，CyclinD1蛋白异常表达是恶性肿瘤的首发事件[10-11]。还有研究发现[12]，90%以上的甲状旁腺癌，40%左右的甲状旁腺腺瘤以及60%左右的甲状旁腺病理组织内存在CyclinD1蛋白阳性表达情况，这与本组研究结果相似。本组研究还发现，分化程度为中低分化、有淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期的甲状旁腺癌患者的CyclinD1蛋白阳性表达率较高，表明分化程度、TNM分期以及是否淋巴结转移也与CyclinD1蛋白阳性表达率密切相关。但年龄、性别与甲状旁腺癌CyclinD1蛋白阳性表达率无关。随后的多因素Logistic回归分析，CyclinD1蛋白阳性表达率与分化程度和TNM分期进入回归方程，其OR值分别为4.153和4.205。

Menin蛋白分子量为67 kD，共有640个氨基酸。Menin蛋白可调节多种基因的转录途径，如促进p18、p27转录，抑制染色质修饰酶活性抑制转录水平，抑制周期依赖性酶活性等[13]。Menin蛋白还可抑制TGF-β转化生长因子表达，并抑制其介导的细胞增殖、分化、迁移以及凋亡反应。有研究发现[14]，Menin蛋白失活可阻断TGF-β的促甲状旁腺细胞增殖、分泌功能。但Menin蛋白对细胞增殖的抑制效应仅存在于内分泌细胞内，在其他细胞内，Menin蛋白反而具有致癌能力[15]。而甲状旁腺癌属于内分泌癌的1种，因此，本组研究中，甲状旁腺癌患者组织中的Menin蛋白阳性表达率低于良性甲状腺肿瘤组患者，表明Menin蛋白低表达与甲状旁腺癌密切相关。进一步的研究显示，分化程度为中低分化、有淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期的甲状旁腺癌患者的Menin蛋白阳性表达率较低，表明分化程度、转移与否以及TNM分期与Menin蛋白阳性表达率有关。多因素Logistic回归分析，表明Menin蛋白表达率与分化程度和TNM分期密切相关。

本研究通过分组实验，发现CyclinD1、Menin蛋白异常表达是甲状旁腺癌发生、发展的重要分子因素，其表达水平还与患者疾病分化程度及TNM分期有关，提示临床或可通过检测CyclinD1、Menin蛋白表达水平来诊断，评估甲状旁腺癌严重程度。甲状旁腺癌分子机制多元，并且这些分子机制间也可能存在一定联系，本组研究仅对CyclinD1、Menin蛋白进行了探究，研究系统性、全面性还存在一定不足，这有待我们随后的研究完善。

综上所述，甲状旁腺癌患者的CyclinD1蛋白阳性表达率较高，Menin蛋白阳性表达率较低，且受分化程度和TNM分期的影响。