虾青素对过氧化氢诱导的骨髓间充质干细胞氧化应激的保护作用

李露壮，姜衍，徐爱华，辛昊，王京杨，孙永新

（中国医科大学 1.附属第一医院康复医学科；2.附属第一医院药学部，沈阳 110001；3.口腔医学专业102期，沈阳 110122）

骨髓间充质干细胞（bone marrow messenchymal stem cell，BMSC）是从骨髓中分离出的具有强大增殖和分化能力的多能干细胞［1］。近年来，BMSC广泛用于治疗骨骼肌肉疾病，包括骨与肌腱软骨再生和骨不连等。由于病变组织局部活性氧增加及清除失衡［2］而产生氧化应激微环境，导致细胞在移植后大量死亡，从而极大影响了疾病预后。因此，探索移植后BMSC抗氧化应激和抗凋亡的方法，是促进BMSC移植后存活的关键［3］。虾青素是一种安全无毒的脂溶性、橙红色类胡萝卜素，在生物体内发挥抗氧化、抗炎、抗凋亡等多种作用［4］。氧化应激可能通过核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid-2-related factor 2，Nrf2）/抗氧化响应元件（antioxidant response element，ARE）信号通路诱导细胞凋亡［5-6］。

本研究采用过氧化氢（H2O2）诱导BMSC建立氧化应激模型，通过检测细胞存活率、细胞凋亡率、还原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）含量、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性、丙二醛（malonyldialdehyde，MDA）含量及Nrf2/ARE通路相关蛋白表达量的改变，探讨虾青素对体外BMSC氧化应激模型的预保护作用及可能的机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞：人BMSC细胞株（中国科学院细胞库）。

1.1.2 试剂：虾青素标准品、CCK-8检测试剂、MDA检测试剂盒、SOD检测试剂盒、GSH检测试剂盒、30%H2O2溶液、ECL显影液（北京索莱宝公司）；二甲基亚砜（美国Sigma公司）；DMEM高糖培养基（美国Gibco公司）；胰蛋白酶（中国Genview公司）；胎牛血清（中国四季青公司）；Nrf2抗体、血红素加氧酶-1（heme oxygenase 1，HO-1）抗体、还原型辅酶/醌氧化还原酶1（quinone oxidoreductase 1，NQO1）抗体（美国ABclonal公司）；Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒（中国诺唯赞公司）。……