Fibulin-2在肝癌中的表达及其与MMPs、VEGF的相关性研究

任 超，葛勇胜，荚卫东，石 旭，陈 新，刘 松

肝细胞癌（hepateocllular carcinoma，HCC，简称肝癌）是原发性肝癌（primary liver cancer，PLC）中最常见的一种，在我国其发病率和病死率分别位于第4位和第3位。随着医疗水平及早期预防意识的提高，HCC患者的诊治有了长足的进步，但术后频繁的复发与转移仍然是威胁肝癌患者长期生存的主要危险因素。细胞外基质（extracellular matrix，ECM）是一种分布在细胞表面为细胞提供结构支持以及维持动态平衡的分子，肿瘤进展的众多复杂机制中就包括细胞与ECM的黏附、蛋白酶分泌、ECM降解等过程。而原纤维蛋白2（Fibulin-2）作为ECM的主要成分之一，被认为在癌症的发展中起着重要作用，并且已经被证明对癌细胞既有致癌活性又有肿瘤抑制活性，而Fibulin-2在HCC中的表达及其影响HCC发生发展的相关作用机制尚不清楚。该研究将初步探讨Fibulin-2对HCC的具体作用及其可能的机制。

1 材料与方法

1.1 病理标本与实验试剂

该研究收集了20例新鲜冷冻肝癌组织及相对应癌旁组织（距离肿瘤边缘至少2 cm，来自安徽省肝胆胰重点实验室冷冻标本库）用于Western blot及qRT-PCR实验检测。兔抗人基质金属蛋白酶 2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）抗体、兔抗人基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）抗体购自北京博奥森公司；鼠抗人血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）抗体、兔抗人 Fibulin-2抗体购自美国Abcam公司；TRIzol试剂购自美国Life technogies公司；PrimeScriptRT reagent Kit with gDNA Eraser购自日本Takara公司；Novostart SYBR qPCR SuperMix Plus购自上海 novoprotein公司；3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐 [3-（4，5-dimethylthiahiazol-2-yl）-2，5-diphenytetrazolium bromide，MTT]检测试剂盒、凋亡试剂盒购自上海BestBio公司；肝癌HepG2细胞株购自上海细胞库。

1.2 实验方法

1.2.1 Western blot实验 剪取组织，称重，每个样品质量在100 mg左右，加入RIPA细胞裂解液1 ml（内含1 mmol／L苯甲基磺酰氟）进行裂解。……