外源性Apelin-13通过调控VEGF／PI3K／Akt信号通路促进大鼠股骨骨折愈合

曾昭池，汤 勇，张先慧，朱志勇，吴开元，袁永端

骨折是最常见的外科损伤，促进骨再生、骨质生成和钙化在骨缺损修复中十分重要。Apelin是血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白（APJ）的内源性配体，可介导血管生成和血管形成，Apelin-13是其中研究最为广泛的一类 Apelin。有研究表明，Apelin-13可参与调节糖尿病、肥胖、高血压、心血管等疾病的病理生理过程，但目前有关Apelin-13促进骨折愈合的研究鲜有报道。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）作为一种重要的血管生成因子，具有促进内皮细胞增殖、促进血管生成等重要的生物学功能。众多研究表明，VEGF可调控PI3K／Akt信号通路的激活，由此推测Apelin-13可能通过VEGF／PI3K／Akt信号通路诱导血管新生从而促进骨折愈合。该研究拟通过构建股骨骨折大鼠模型，探讨Apelin-13对骨折愈合的影响及可能作用机制，为临床上骨折的愈合研究提供新的方向和思路。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康SPF级6～7周龄雄性SD大鼠40只，体质量（240±20）g，由湖南嘉泰实验动物有限公司提供，动物生产许可证编号：SCXK（湘）2019-0003。饲养条件为SPF级环境，温度为（23±2）℃，湿度为50% ～60%，12 h／12 h明暗交替，自由饮水、进食。

1.2 主要试剂与仪器

Apelin-13（批号：SC-351718，规格：1 mg）购自美国 Santa Cruz公司；大鼠骨源性碱性磷酸酶（bone alkaline phosphatase，BALP）、Ⅰ型前胶原氨基端前肽（amino terminalpropeptide of typeⅠ procollagen，PINP）、Ⅰ型胶原C端肽（C-terminal telopeptides of typeⅠ collagen，CTX）、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b（tartrate resistant acid phosphatase-5b，TRACP-5b）ELISA试剂盒购于美国 R＆D公司；VEGFA、VEGFR2、PI3K p85、Akt、p-Akt（Ser473）和 β-actin抗体购于美国 Cell Signaling Technology公司；BCA试剂盒、苏木精、伊红购于上海碧云天生物公司；TRIzol、逆转录试剂盒、荧光定量PCR试剂盒购自日本TaKaRa公司；FC全自动酶标仪购于美国Thermo公司；SYSTEM GelDoc XR＋凝胶成像系统购自美国Bio-Rad公司。

1.3 方法

1.3.1 动物造模及分组处理 40只雄性SD大……