m iR-122-5p靶向ADAM 10调控Notch信号通路对人卵巢癌细胞SKOV-3的上皮-间质转化的抑制作用

李根林，刘 杰，谢 晶，余芙蓉，胡 意

上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transformation，EMT）使肿瘤细胞失去上皮特性，获得间质特性，促进肿瘤细胞侵袭和转移。研究表明EMT与卵巢肿瘤的转移有关。去整合素金属蛋白酶10（a disintegrin and metalloprotease 10，ADAM10）是细胞膜相关蛋白，能触发配体-受体结合而激活Notch信号通路，调节细胞迁移。但 ADAM10是否通过Notch信号通路参与卵巢癌细胞的迁移尚不清楚。microRNA（miRNA）是一种非编码的小RNA，调控靶向信使 RNA（mRNA）。miR-122-5p在卵巢癌患者外泌体中异常低表达，但miR-122-5p对人卵巢癌EMT的作用尚未明确。该研究通过共转染miR-122-5p过表达和ADAM10过表达载体，探讨miR-122-5p与ADAM10的靶向关系以及Notch信号通路在人卵巢癌细胞EMT的作用机制。

1 材料与方法

1.1 细胞株、主要试剂和仪器

人卵巢癌细胞SKOV-3及McCoy′s 5a培养基购自美国ATCC公司；胎牛血清和完全培养基购自美国Gibco公司；胰蛋白酶购自武汉纯度生物科技有限公司；转染试剂Lipofectamine 3000购自美国Invitrogen公司。TRIzol试剂购自上海晶抗生物工程有限公司；BCA蛋白质定量检测试剂盒和蛋白裂解液购自上海生工；Matrigel购自美国BD公司；逆转录试剂盒和荧光定量PCR试剂盒购自大连宝生物工程公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自美国Promega公司；ADAM10野生型（Wt）和突变型（Mut）荧光素酶质粒载体pcDNA-ADAM10（pc-ADAM10）、miR-122-5p mimic及其阴性对照mimicNC均由上海吉玛制药技术有限公司合成；兔抗人ADAM10抗体购自美国Novus Biological公司；兔抗人Notch1抗体、兔抗人HES家族bHLH转录因子1（hairy and enhancer of splithomolog-1，HES1）抗体、兔抗人 Hairy相关转录因子1（hariy and enhancer of split related with YRPW motif-1，HEY1）抗体、兔抗人Snai1抗体、兔抗人E-cadherin抗体、兔抗人N-cadherin抗体和GAPDH购自英国Abcam公司；辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG购自武汉博士德生物工程有限公司。实时荧光定量仪（7500）购自美国应用生物系统公司；……