幼羊颅骨缺损修复中LncRNA的差异性表达及作用
2021-02-07 01:55:50张春阳
安徽医科大学学报
2021年1期
刘 岩，邵 国*，张春阳
颅骨缺损修补是神经外科的一个难题，多种因素可以影响缺损区颅骨的生长。长链非编码RNA（long noncoding RNA，LncRNA）能与 DNA、RNA、蛋白质结合形成由LncRNA参与的复杂的基因表达调控网，进而参与骨损伤后的修复。Bu et al发现LncRNA t6通过下调miR-30a-5p，促进颗粒诱导的成骨细胞凋亡。碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）是一种由骨细胞分泌的磷酸酯酶，在骨组织广泛存在。骨钙素（osteocalcin，OCN）可间接反映成骨细胞的活跃水平。ALP、OCN的含量反应机体骨组织的代谢情况。在颅骨组织损伤时，骨的吸收和代谢因子发生变化，如血清 ALP、OCN等。然而在幼羊颅骨缺损再生中ALP、OCN的表达情况还没有被明确。
该研究通过测序探究在原生、新生骨组织中LncRNA的差异性表达与其联系的MicroRNA、Wnt／β调控骨生长的关系，确定差异性表达的LncRNA在幼羊颅骨缺损修复表达调控的意义，为临床上颅骨缺损的治疗提供新的理论基础。
1 材料与方法
1．1 实验动物及试剂、仪器
普通级雄性1月龄小尾寒羊12只，体质量（5.5±0.5）kg，来源于内蒙古科技大学包头医学院动物实验室[SCXK（蒙）K2016-0003]，无菌手术在内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院中心实验室[SYXK（蒙）K 2005-0019]进行，动物实验由内蒙古科技大学包头医学院医学生物学研究所动物实验伦理审查委员会通过，伦理审批IACUC号：2016-033。RIPA裂解液及蛋白酶抑制剂（PMSF）购于上海碧云天生物技术有限公司（货号：P0013C，ST505）；兔源 Wnt（货号：1243243-89-1）、β-catenin（货号：ab6302）、β-actin（货号：ab8227）抗体购于美国 Abcam公司；BCA蛋白定量试剂盒（货号：A53225）购于美国Thermo公司；ECL化学发光显色试剂盒（货号：P1010）购于北京普利莱公司；反转录试剂盒、ODSM、UCA1、H19、MEG3和内参 β-actin基因引物购于上海生物工程股份有限公司；……
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