体外电转染TGF-β1质粒对背根神经节轴突生长的影响①

胡译文，张 衡，王锐英，沈 翀，刘瑞端，张 衡，王锐英，沈 翀，刘瑞端

(桂林医学院附属医院骨科，广西 桂林 541001)

周围神经损伤是生活和工作中的常见事件，周围神经在受到机械外力及各种理化因素损伤后，其神经元胞体、轴突、髓鞘等均会发生一系列的变性反应。病理表现为胞体肿大，尼氏体溶解或消失。修复周围神经损伤的关键是神经元胞体的存活及轴突的延伸[1]。近年来运用转基因技术治疗周围神经损伤已成为研究热点[2]。转化生长因子β1(transforming growth factor beta1，TGF-β1)是一种相对分子质量为 25 000 的活性多肽，属于转化生长因子TGF-β(transforming growth factor beta)多肽家族，具有拮抗肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-alpha，TNF-a)的效应，抑制细胞内钙离子浓度变化，拮抗兴奋性氨基酸的神经毒性作用。周围神经挤压损伤，TGF-β1含量上升[3-4]。质粒是小型环状DNA分子，是基因工程最常用、最简单的载体。笔者应用电转染方法将构建的TGF-β1质粒转染入背根神经节细胞中[5]，培养背根神经节细胞，然后，观察TGF-β1对背根神经节细胞轴突生长的影响。

1 材料和方法

1.1 实验动物

8～10周龄C57BL/6健康雄性小白鼠6只，体重25～35 g，来源于桂林医学院实验动物中心。小鼠的饲养与实验均在桂林医学院实验动物中心完成，环境温度控制在20～23 ℃，湿度控制在40%～50%，室内光照时间为10∶00 am至22∶00 pm，黑暗时间为22∶00 pm至10∶00 am。动物饲料及饮用水均按照严格规范进行处理，小鼠饮用水pH值为3.0～3.5，按需、定期更换笼具及饮水瓶。

1.2 主要实验仪器和试剂

倒置荧光显微镜(德国Carl Zeiss)；NucleofectorRII 细胞核转染仪，Amaxa电转液(德国Lonza)；TGF-β1质粒(美国Clontech)；pBR322质粒(美国Thermo Scientific)；胰酶，Ⅱ型胶原酶(Gibco公司)；MEM培养基，胎牛血清，兔抗小鼠TGF-β1单克隆抗体，β-actin单克隆抗体，红色荧光二抗免疫组织化学试剂(美国cell singling)；……