猪δ冠状病毒的分离鉴定及其遗传进化分析

方谱县，刘康，张蕙畅，夏思进，张健淞，任杰，肖少波，方六荣

华中农业大学农业微生物学国家重点实验室/华中农业大学动物医学院/湖北省生猪健康养殖协同创新中心，武汉 430070

猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)是近年来新发现的一种猪肠道致病性冠状病毒，主要感染新生仔猪，临床症状与猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea，PED)和猪传染性胃肠炎(porcine transmissible gastroenteritis，TGE)相似，以腹泻、呕吐、脱水为主要特征[1-3]。自2014年初在美国暴发后，加拿大、韩国、中国、泰国、越南、老挝、日本等国家也相继从猪腹泻样品中检测到PDCoV，给养猪业造成了较大的经济损失[4]。临床上PDCoV常与其他病毒混合感染，比如PEDV、TGEV以及PRRSV[5-6]。最近研究表明PEDV和PDCoV混合感染比单一病毒感染具有更严重的临床症状，这给肠道病毒的防控带来很大的挑战[7]。目前，尚无商品化的疫苗可用，病毒的分离培养对PDCoV诊断方法的建立和疫苗的研制及致病机制的研究具有十分重要的意义。

PDCoV为单股正链RNA病毒，基因组大小约为25.4 kb，属于冠状病毒科、δ冠状病毒属成员，具有其他冠状病毒类似的基因分布(5′ UTR-ORF1a-ORF1b-S-E-M-NS6-N-NS7-NS7a-3′ UTR)。其中，ORF1a和ORF1b编码2个多聚蛋白pp1a、pp1ab，被自身编码的木瓜样蛋白酶(nsp3)和3C样蛋白酶(nsp5)加工成15个非结构蛋白；3′端基因组编码4个结构蛋白[刺突蛋白(S)，小膜蛋白(E)，膜蛋白(M)，核衣壳蛋白(N)]以及3个辅助蛋白(NS6，NS7，NS7a)[8-10]。目前，PDCoV是唯一通过体外细胞培养成功分离的δ冠状病毒属成员，是研究δ冠状病毒属病毒的良好模型。研究发现PDCoV具有非常广泛的宿主嗜性[11]，对牛、鸡、小鼠以及火鸡易感，甚至还可以感染人[12-15]，提示该病毒具有跨种传播的能力，给动物和人类健康带来危险。……