花椒几丁质酶基因ZaCHIT1的原核表达及纯化

杨德奕， 毛俊文， 赵德刚， 赵懿琛，

(1.贵州大学茶学院/山地植物资源保护与种质创新省部共建教育部重点实验室/贵州省农业生物工程重点实验室， 贵阳 550025；2.贵州大学生命科学学院/山地植物资源保护与种质创新省部共建教育部重点实验室/贵州省农业生物工程重点实验室， 贵阳 550025;3.贵州省农业生物工程重点实验室， 贵阳 550025)

花椒(ZanthoxylumpiperitumDC.)别名山椒，属芸香科花椒属植物，常见为灌木或落叶小乔木[1]。花椒具有多种药理活性，并有显著的抗真菌作用和抗细菌作用[2]。植物的几丁质酶是一种病程相关蛋白，在植物生长和发育过程中发挥作用，如在授粉、衰老、萌发和体细胞胚胎发生过程[3-4]。可以将真菌的细胞壁的成分几丁质为底物水解成寡聚糖，在植物对抗真菌病害中起重要作用，因而广泛应用于植物抗病基因工程[5]。杨晋明等[6]使用农杆菌介导法把水稻几丁质酶基因导入甜瓜品种“雪脆蜜2号”，进行了田间抗病的生物学鉴定，结果发现，转基因植株提高了“雪脆蜜2号”对白粉病的抗性；罗晶晶等[7]接种白粉菌后在几个不同的时间点对黄瓜抗病品种JIN 5-508的表型进行观察，并且取样以测定几丁质酶基因的表达量升高或降低，结果表明，接种白粉菌后JIN 5-508黄瓜的几丁质酶基因表达量有了明显上升，尤其在接种白粉菌后的24 h时，抗病JIN 5-508黄瓜出现明显的乳突反应，以此来阻止白粉菌的入侵，说明在JIN 5-508黄瓜防御白粉菌侵染过程中几丁质酶基因起到了正向调控作用。本实验组前期已证实几丁质酶存在于花椒的各部位(如茎、果实、叶等)以及对各部位表达量的高低进行了研究[8]，但对花椒几丁质酶的原核表达以及纯化并没有进行深入研究。……