嘌呤核苷磷酸化酶与嘧啶核苷磷酸化酶的融合表达及酶法合成嘌呤核苷类产物

徐玲玲，康丽峰，刘高飞，何冰芳，储建林

(1.南京工业大学 药学院，江苏 南京 211816; 2.常州市第一人民医院，江苏 常州 213003； 3.南京工业大学 生物与制药工程学院，江苏 南京 211816)

核苷类药物是临床上重要的抗病毒、抗肿瘤药物[1-2]，主要有：齐多夫定、阿巴卡韦等可用于治疗艾滋病；恩替卡韦、替比夫定等可用于治疗乙肝病毒；克拉屈滨、氟达拉滨等可用于治疗白血病、淋巴瘤等肿瘤疾病[3-5]。核苷类化合物以化学法合成报道居多，该方法是利用保护的碱基与多羟基选择性保护的核糖进行缩合反应来制备核苷类产物，但得到的核苷产物往往是核糖(阿糖)α、β同分异构体产物；化学法也可以利用天然核苷类化合物为原料，对其碱基或核糖基进行修饰，得到其核苷类化合物的新型衍生物[6]。化学法合成核苷类产物往往需要多步反应，对活性基团修饰保护与脱保护，使用重金属等特点，不利于环保[7]；甚至还需要对其异构体拆分，才能得到活性β型核苷类产物，糖异构体的化合物一般难以分离获得高纯度的单一异构体核苷产物，化学法合成核苷产物的最终产率往往不是很高[7-8]。

生物酶法合成核苷类药物具有无需保护、步骤少、无糖异构体产物生成等特点与优势[6-8]。目前，生物酶法催化合成核苷类药物主要有核苷磷酸化酶和N-脱氧核糖转移酶两大类酶[8]。依据核苷磷酸化酶对嘌呤与嘧啶类底物的选择性，可细分为嘧啶核苷磷酸化酶和嘌呤核苷磷酸化酶[9-10]。核苷磷酸化酶对糖供体选择范围较为宽泛，能识别核糖、脱氧核糖等多种核苷类糖供体，被用于核苷类产物的合成制备方面较为引人注目[9-10]。……