血神经屏障和Claudin-1蛋白在大鼠慢性神经病理性疼痛中的作用

杨少兵，胡柳，迟晓慧，张志发

神经病理性疼痛是神经系统受损导致的慢性或持续性疼痛，其主要特征是自发痛、痛觉过敏、触诱发通和感觉异常，并在神经损伤后持续很长时间，严重影响患者的生活质量。目前关于神经病理性疼痛的发病机制尚未明了，且对其治疗也存在很多缺陷。深入探索疼痛的发病机制，寻找疼痛治疗靶点，对提高疼痛治疗效果有着深远的意义。

最近研究表明血神经屏障（blood nerve barrier，BNB）参与神经病理性疼痛的发生发展[1]。BNB主要由神经束膜和神经内膜组成，正常情况下能够维护神经内环境稳定，保护神经纤维。但在某些病理状态下（如坐骨神经受损后），BNB通透性增加，屏障功能减弱[2]，外周的纤维蛋白原及炎性因子穿过通透性增加的BNB，作用于外周神经导致痛阈值降低，参与慢性疼痛的病理过程[3]。但BNB在疼痛中的具体调节机制尚不清楚。紧密连接是BNB的结构基础之一，密封蛋白（Claudin）-1是紧密连接蛋白中最重要的一种，Claudin-1表达下降导致BNB通透性增加[4]，可能是慢性疼痛发生发展的关键环节。本研究拟制备慢性坐骨神经压迫损伤（chronic constriction injury of sciatic nerve，CCI）模型大鼠，观察Claudin-1和BNB通透性的变化，探讨其在慢性神经性疼痛中的具体作用。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与材料

清洁级雌性SD大鼠，体质量180～200 g，购自华中科技大学同济医学院实验动物中心。伊文斯蓝（Evans blue，EB）购自美国Sigma Aldrich公司；兔抗Claudin-1单克隆抗体购自德国Life Technologies公司（货号51-9000），β-actin抗体购自Sigma Aldrich公司（货号#A3854），Lumi-Light荧光试剂盒和DAPI均购自德国Roche公司。逆转录PCR（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）引 物 购 自 德 国MWG Eurofins公司。……