大鼠心肌延迟缺血再灌注损伤模型的建立及其心功能和心肌细胞凋亡情况观察

唐咏文，崔同涛，刘勇，王敏，郭涛，刘津，谭宁

1广东省人民医院（广东省医学科学院），广州510080；2广州医科大学附属第一医院

急性心肌梗死（AMI）不仅导致心肌损伤，还可诱发慢性心力衰竭。心脏对缺血缺氧敏感，再灌注后出现心肌损伤加重，甚至诱发心功能恶化［1］，即缺血再灌注损伤（IRI）。细胞发生IRI时心肌细胞凋亡增加，从而导致心功能降低［2］。当延迟再灌注或再灌注后出现慢血流、持续泵衰竭或休克时，特别是再灌注后心肌酶学持续升高时，如何有效降低再灌注损伤是治疗的关键。研究显示，AMI后24～48 h接受延迟经皮冠状动脉介入再灌注治疗的院内病死率和重度左心室功能不全发生率较常规药物组降低［3］。因此，认识延迟再灌时心肌损伤机制可为探索更优的治疗方案提供基础支持，而建立相应的动物模型是研究的前提。为了更加接近临床早期IRI过程，2016年1月—2018年6月我们在动物模型上实现较长缺血后的有效再灌注，并观察心肌细胞凋亡及心功能的变化加以验证。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 SPF级雄性SD大鼠105只，8～10周龄，体质量200～270 g，购自广东中医药大学实验动物中心。实验在屏障系统中完成，饲养环境温度23～29℃，相对湿度40%～50%。实验已通过广东省人民医院动物实验伦理［伦理号：GDREC2014016H（R1）］，操作遵守国家卫生研究院实验动物福利实验指南。

1.1.2 主要试剂与仪器 三苯基四唑氯化物（TTC，上海Invitrogen），依文思蓝（Evens Blue，美国Sigma），TUNEL试剂盒（瑞士Roche），Bax抗体、Bcl-2抗体、激活态Caspase-3（Cleaved Caspase-3）抗体（美国CST），GAPDA抗体（美国Protein Tech.）。小动物呼吸机R407（深圳瑞沃德），动物心电图机（成都泰盟BL-420F生物机能实验系统），倒置显微镜（德国莱卡），M型动物心脏超声仪（日本Visual Sonics Vevo 2100）。……