白灵芝提取物对大鼠肝星状细胞增殖、活化及Wnt/β-catenin信号通路的影响

肖毅力，张宝月，张亚红，宋正己

1昆明理工大学医学院，昆明650500；2云南省第一人民医院

肝纤维化是所有慢性肝病发展为肝硬化必经的病理过程，是各种慢性肝病损伤修复过程的共同结果，并与肝癌的发生有关。肝纤维化发生的关键因素是肝星状细胞（HSC）的增殖和活化［1］，活化的HSC是肝组织中细胞外基质（ECM）的主要来源［2］，对HSC增殖与活化的抑制一直是抗肝纤维化研究的核心。在慢性肝损伤时，HSC激活表型转化为表达α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）［3］。HSC的活化由许多炎症细胞因子和生长因子介导，包括结缔组织生长因子和转化生长因子β1（TGF-β1）。TGF-β1是从HSC产生ECM的主要刺激物，且在纤维发生过程中表达增加［4-5］。此外，研究表明，持续的 Wnt/βcatenin通路激活与肺脏、肝脏、肾脏及皮肤纤维化等的发病机制有关［6］。Frizzled-4是Wnt/β-catenin信号通路的关键受体蛋白，Frizzled-4的表达量直接影响细胞内β-catenin水平，β-catenin的核内累积是Wnt信号通路活化的重要标志［7］。灵芝是中国传统药物，具有抗肿瘤、抗氧化、保肝等作用；白灵芝属于灵芝的一种，为中国西南地区特有品种。2017年6月—2019年2月，我们观察了白灵芝提取物（GLE）对大鼠HSC增殖、活化的影响，并探讨其是否与Wnt/β-catenin信号通路有关，以期为防治肝纤维化提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 主要材料 GLE由云南农业科学院昆虫生物医药研发重点实验室提供，于-20℃冰箱保存；大鼠HSC-T6购自中国科学院昆明动物所细胞库。青霉素—链霉素双抗（BI公司），CCK8（碧云天），特级胎牛血清（美国GIBCO），DMEM高糖培养基（BI公司）；一抗GAPDH、Frizzled-4、β-catenin抗体（英国Abcam），二抗兔抗兔（CELL SIGNALING），SDSPAGE凝胶试剂盒（碧云天），BCA蛋白浓度测定试剂盒（碧云天），Chemidoc XRS成像系统（BIORAD），Trans-blot电泳槽组件（BIO-RAD）；……