高通量测序鉴定中间锦鸡儿干旱条件下的microRNA

苏雨萌, 张旭婷, 特日格乐, 田敏, 尚晓蕊, 李国婧, 王瑞刚

(内蒙古农业大学生命科学学院, 植物逆境生理与分子生物学自治区重点实验室, 呼和浩特 010018)

中间锦鸡儿(CaraganaintermediaKuang)是豆科锦鸡儿属荒漠多年生灌木，分布于中国西部、西北和内蒙古的沙质草原和荒漠地区，在固沙、保土、保水等方面发挥着重要作用，具有很高的饲用和生态价值[1]。因其具有较强的抗旱抗盐能力，中间锦鸡儿被认为是阐明对非生物胁迫耐受机制的理想植物。近年来对其分子响应机制的研究日益增多，一些转录因子如NAC[2]、MYB、WRKY[3]和bHLH[4]被鉴定。microRNA(miRNA)是植物体内普遍存在的一类内源性单链20～24 nt非编码RNA，作为mRNA表达的关键调控因子之一，在植物的基因调控、发育过程和应激反应中起着重要作用[5]。干旱作为重要的非生物胁迫之一，目前，针对miRNA响应干旱胁迫研究已经在拟南芥(Arabidopsisthaliana)、蒺藜苜蓿(Medicagotruncatula)、大豆(Glycinemax)、水稻(Oryzasativa)、玉米(Zeamays)、烟草(Nicotianatabacum)等植物中有相关报道[6-7]。miRNAs在植物适应干旱胁迫中起着重要的作用，一些miRNA通过调节酶的代谢和与转录因子相互作用来适应干旱环境[8-10]。因此，对中间锦鸡儿抗旱相关miRNA的鉴定可为进一步阐明抗旱分子机制和锦鸡儿属及豆科植物遗传改良奠定基础。

1 材料与方法

1.1 植物材料和干旱处理

选取同一株植物的中间锦鸡儿种子，播种于营养土与蛭石(1:3)中，在光照16 h/黑暗8 h，昼夜温度22～25 ℃的生长室中培养30 d，选取生长状态一致的中间锦鸡儿小苗，从培养钵中取出，尽量避免损伤和刺激，置于原培养环境中进行干燥脱水处理……