下调SLC6A3对肾透明细胞癌细胞SNU-349增殖、迁移的影响

王 佳，艾中中，周 菁

1.空军军医大学西京医院泌尿外科，陕西 西安 710000；

2.西安医学院第二附属医院口腔科，陕西 西安 710000；

3.陕西省肿瘤医院肿瘤内科，陕西 西安 710061

肾细胞癌作为常见的恶性肿瘤，发病率呈逐年上升趋势，其中80%的组织学亚型为肾透明细胞癌［1］。虽然肾透明细胞癌可以通过手术治疗进行切除，但约有30%的患者在确诊初期已发生转移，即便手术切除，后期也有将近40%的患者会出现转移［2］。因此，探究肾透明细胞癌的发生、发展机制具有重要意义。

溶质载体家族6成员3（solute carrier family 6 member 3，SLC6A3），也被称为DAT1，是一种多巴胺转运蛋白，在多项研究［3-4］中已被证实在肾透明细胞癌患者中表达上调，可以作为生物标志物用于诊断肾透明细胞癌，但SLC6A3对肾透明细胞癌具体的调控机制尚不清楚。本研究探讨SLC6A3对肾透明细胞癌细胞增殖、迁移的影响，并对可能涉及到的分子机制进行分析。

1 材料和方法

1.1 材料

人肾皮质上皮细胞HK-2及肾透明细胞癌细胞SNU-349购自美国典型培养物保藏中心（American Type Culture Collection，ATCC）。DMEM培养基及胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）购自美国Gibco公司。RNA提取试剂盒及实时荧光定量聚合酶链反应（realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）试剂盒购自天根生化科技（北京）有限公司。二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白测定试剂盒及细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8，CCK-8）购自上海碧云天生物技术有限公司。SLC6A3、磷脂酰肌醇3激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）、蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）及磷酸化抗体购自美国Cell Signaling Technology公司；shSLC6A3（5’-CACCGGGCAAGAAGATCGACTTTCTTTC AAGAGAAGAAAGTCGATCTTCTTGCCC-3’）和shNC（5’-CACCGCTTCACGGTCATCCTCAT CTCGAAAGATGAGGATGACCGTGAAGC-3’）质粒购自苏州吉玛基因股份有限公司；AnnexinⅤ-FITC/PI试剂盒购自北京欣博盛生物科技有限公司；Transwell小室购自美国Corning公司。

1.2 组织样本收集

收集2017年1月—2018年1月在陕西省肿瘤医院收治确诊的肾透明细胞癌患者56例，取其手术切除的肾透明细胞癌标本及相应的癌旁组织，置于-80 ℃保存待用。……