菊花滑刃线虫RPA 检测方法研究

林 宇，鞠玉亮，刘 娟，王金成，高 建，郑春生，魏亚东，黄国明

（1. 天津海关动植物与食品检测中心，天津 300461；2. 安徽农业大学，安徽 合肥 230036；3. 北京海关技术中心，北京 101300）

菊花滑刃线虫（Aphelenchoides ritzemabosi）是一种植物专性寄生线虫，既能以内寄生方式寄生于植物组织内，又能通过外寄生方式附着于植物花、叶、芽生活[1]。该线虫可寄生于200 种以上高等植物，菊花是其典型危害寄主。其侵染菊花后可引起菊花枯叶病，导致叶片枯死、花芽生长发育受阻或出现畸形。同时该线虫抗逆性强，在种子、植物组织、介质土壤以及植物病残体中能够以休眠或脱水状态长时间存活，具有较高的远距离传播扩散风险[2]。目前，菊花滑刃线虫已在世界70 个以上国家发生，我国的江苏、福建、江西、河南、湖北、广东、广西、贵州、四川、云南等地也发现其为害，对菊花、草莓、烟草等农作物的生产造成了严重影响[3-5]。

伴随着分子生物学技术的快速发展和广泛应用，植物寄生线虫的分类鉴定也从经典的形态学方法拓展到以PCR 为基础的变温分子检测技术和恒温分子检测技术，如PCR-RFLP、SCAR 标记、实时荧光PCR、LAMP、DNA 条形码[6]等，这些鉴定技术为植物线虫的分类鉴定提供了更可靠、更成熟的手段。重组酶聚合酶扩增（recombinase polymerase amplification，RPA）技术是一种在常温下进行核酸扩增的方法，属于等温核酸体外扩增技术的一类[7]。其原理是利用重组酶与引物形成聚合体，在模板DNA 上搜索与之完全互补配对的DNA 序列，通过单链DNA 结合蛋白的作用使模板DNA 解链，同时在DNA 聚合酶的作用下，完成复制延伸过程[8]。……