钙激活的氯离子通道A4通过抑制JAK激酶2/信号转导及转录激活蛋白3信号通路对食管癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

食管癌是临床常见恶性肿瘤之一，其主要病理类型为食管鳞癌、食管腺癌，近年来，随着生活方式的改变，我国食管癌发病率逐年升高。由于食管癌早期发生迁移及侵袭导致病人术后生存率较低。钙激活的氯离子通道A4（Calcium-Activated Chloride Channel A4，CLCA4）在头颈部鳞状细胞癌中呈低表达，其低表达量与病人预后不良有关。相关报道指出CLCA4在结直肠癌中呈低表达并可能发挥抑癌基因作用。但CLCA4在食管癌发生及转移过程中的调控机制尚未可知。JAK激酶2/信号转导及转录激活蛋白3（JAK2/STAT3）信号通路可参与细胞增殖、凋亡、等生物学过程，肿瘤发生过程中该信号通路处于活化状态并可促进肿瘤发展进程。但CLCA4是否可通过调控JAK2/STAT3信号通路影响食管癌发生及转移过程尚未可知。本研究于2019年1月至2019年8月首先检测CLCA4在食管癌细胞系中的表达，选择表达最低的细胞系进行后续研究，探讨CLCA4过表达对食管癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

正常人食管鳞状上皮细胞Het-1A与人食管癌细胞KYSE170、Eca109、TE10均购自美国ATCC细胞库。结晶紫均购自陕西碧云天生物；BCA蛋白定量检测试剂盒、化学发光试剂ECL、十二烷基硫酸钠（SDS）购自美国Pierce；pcDNA3.1购自上海柯雷生物；JAK2/STAT3信号通路激活剂磷酸化JAK激酶2（p-JAK2）多肽购自上海吉尔；Lipofectamine2000与Trizol试剂购自美国Invitrogen；反转录试剂盒购自美国Promega；荧光定量PCR试剂盒购自美国ABI；Transwell小室购自美国Chemicon；Matrigel基质胶购自美国BD；3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）购自齐一生物科技（上海）有限公司；兔抗人细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、依赖性激酶抑制因子（P21）抗体购自美国Santa Cruz；……