外周血PCA3基因mRNA检测诊断前列腺癌临床应用价值

汤山松 杨 霞

四川省资阳市人民医院肿瘤科 641300

目前，PC常用的筛查方法为血清前列腺特异抗原检查，但其体内水平个体差异较大。因此确定其诊断PC的cutt-off值较为困难且临床应用特异性较低。PCA3为新近鉴定的在PC患者中特异高表达的癌基因[1]。有研究显示，与正常人群相比，PCA3 mRNA在PC患者中表达水平呈现显著升高[2-3]。因此，本研究探讨外周血中PCA3 mRNA水平在PC诊断中的可行性，及其作为生物标志物的应用价值。

1 对象与方法

1.1 对象来源 选取2016年2月—2020年4月我院收治的确诊PC患者24例(病例组)和良性前列腺增生(BPH)40例及泌尿系结石患者13例(对照组)作为研究对象。患者纳入标准：患者年龄>50周岁；获取患者标本前均需要签署知情同意书；病理学或细胞学证实PC、BPH或泌尿系结石；PC患者为初诊且既往未接受过治疗。排除标准：患者无细胞学或病理学诊断；合并性传播疾病；合并有其他系统恶性肿瘤；HIV阳性患者均予以排除。

1.2 试剂与仪器 Trizol试剂(美国Invitrogen公司)，逆转录酶MMLV(购自大连宝生物，TAKARA公司)，核酶抑制剂RNAsin，dNTP，DEPC水(购自Tiangen公司)，PCR引物合成(由华大基因完成)，Taq酶，EX TaqTMR-PCR(购自大连宝生物，TAKARA公司)，实时荧光定量PCR仪(购自ABI公司)， 高速离心机(购自美国Beckman公司)，紫外凝胶成像系统(购自美国BIO-RAD公司)。

1.3 标本采集与处理 患者确诊后，抽取静脉血3ml，置入乙二胺四乙酸抗凝的采血管中，并向采血管中加入Trizol试剂吹打混匀，-80℃保存备用。

1.4 实验方法

1.4.1 总RNA提取：Trizol法提取总RNA[4]，取预先收集的外周血0.5ml置于无酶EP管中，向EP管中加入1ml Trizol，涡旋30s，26℃静止6min，低温高速离心(12 000r/min)，离心10min。吸取上层无色澄清液体置入另一无酶EP管中并加入200μl氯仿，剧烈震荡10s，然后26℃放置5min，低温高速离心(12 000r/min)，离心10min。转……